[发明专利]一种独特基因缺失组合的PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株及其应用在审
| 申请号： | 202210040368.5 | 申请日： | 2022-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN114350620A | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 陈陆;邓梦梦;王永生;杜季梅;丁晨梦;杨霞;王新卫;高冬生;郭占达;王川庆 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N7/04;C12N15/38;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/65;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93 |
| 代理公司： | 郑州大通专利商标代理有限公司 41111 | 代理人： | 高为宝 |
| 地址： | 450046 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 独特 基因 缺失 组合 prv ge tk ul56 us3 及其 应用 | ||
1.一种猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株，其特征在于，所述基因缺失毒株为缺失了gE基因、TK基因、UL56基因和US3基因的四基因缺失株PRVΔgE/TK/UL56/US3。
2.根据权利要求1所述的一种猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株，其特征在于，所述PRVΔgE/TK/UL56/US3的保藏编号为：CGMCC No.22936。
3.权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒基因缺失毒株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)PRVΔgE/TK/UL56三基因缺失株的构建：
转移载体pSK-UL56-LR-EGFP构建：扩增PRV UL56基因左右侧基因序列作为同源重组的UL56基因左右侧同源臂，扩增EGFP荧光蛋白序列作为标记基因，将UL56基因左右侧同源臂和EGFP荧光蛋白序列分别经双酶切至线性片段，依次插入同样双酶切处理的线性载体pBluescript SK(-)内，获得转移载体命名为pSK-UL56-LR-EGFP；
重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/EGFP+的获得以及荧光标签的剔除：采用脂质体转染法将重组质粒pSK-UL56-LR-EGFP和PRVΔgE/TK基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/EGFP+；随后将pcGlobin2-Cre质粒和PRVΔgE/TK/UL56/EGFP+基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得重组病毒PRVΔgE/TK/UL56；
(2)PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株的构建：
转移载体pSK-US3-LR-EGFP构建：扩增PRV US3基因左右侧基因序列作为同源重组的US3基因左右侧同源臂，扩增EGFP荧光蛋白序列作为标记基因，将US3基因左右侧同源臂和EGFP荧光蛋白序列分别经双酶切至线性片段，依次插入同样双酶切处理的线性载体pBluescript SK(-)内，获得转移载体命名为pSK-US3-LR-EGFP；
重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP+的获得：采用脂质体转染法将重组质粒pSK-US3-LR-EGFP和PRVΔgE/TK/UL56基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得表达绿色荧光蛋白的重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP+；
重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP+荧光标签的剔除：采用脂质体转染法和Cre-LoxP技术，将pcGlobin2-Cre质粒和PRVΔgE/TK/UL56/US3/EGFP+基因组共转染至293T细胞内，通过蚀斑筛选获得不带绿色荧光标签的重组病毒PRVΔgE/TK/UL56/US3。
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