[发明专利]灵长类动物DNA甲基化相对定量试剂盒

权利要求书

1.灵长类动物DNA甲基化相对定量试剂盒，其特征在于，包括：

a）幼斑马鱼DNA或不含CpG位点的斑马鱼DNA，以及

b）DNA定量检测试剂，其至少包含用于定量检测a）的试剂；

所述幼斑马鱼为自受精卵形成至发育96小时以内的斑马鱼；

所述幼斑马鱼DNA或不含CpG位点的斑马鱼DNA为分离自斑马鱼的天然DNA；

所述幼斑马鱼DNA选自核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：30所示DNA片段中的至少一种，所述不含CpG位点的斑马鱼DNA选自核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：15所示DNA片段中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA定量检测试剂还包含用于定量检测灵长类动物靶核酸的试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述靶核酸选自：

septin9、SDC2、SHOX2、NDRG4、RPRM、RASSF1、MGMT、PITX2、SOX17、vimentin、BMP3、GSTP1、RNF180、RUNX3、MIN25、Twist1、SCNN1B、Vimentin、ZNF545、RASSF2、TAPK、TFPI2、APC、TCF21、p16、hMLH1、BRCA1、DAPK、MDR1、Rb、THBS1、BCL-2、IGF-2、K-ras、MAGE-1、VHL、APAF1、CASP8、FAS、ABCG2、OCT4和WTH3中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA定量检测试剂还包含用于定量检测灵长类动物看家基因的试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述看家基因为Actin、Tubulin或GAPDH。

6.根据权利要求1~5任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA定量检测试剂为引物。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA定量检测试剂还包括探针，所述探针标记有信号物质。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述探针为自身淬灭探针。

9.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包含亚硫酸盐定序试剂。

10.根据权利要求1~5、7~9任一项所述的试剂盒，其特征在于，还含有如下成分的中的至少一种：

DNA聚合酶、扩增缓冲液、dNTP、Mg²⁺、阳性对照、阴性对照以及水。

11.根据权利要求1~5、7~9任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述灵长类动物为人。

12.用于甲基化测定的灵长类动物DNA预处理方法，其特征在于，包括：

a）将幼斑马鱼DNA或不含CpG位点的斑马鱼DNA与待检测的灵长类动物靶核酸混合；所述幼斑马鱼为自受精卵形成至发育96小时以内的斑马鱼；

b）将幼斑马鱼DNA或不含CpG位点的斑马鱼DNA、灵长类动物靶核酸进行亚硫酸盐定序；

其中，a）、b）无先后顺序，所述幼斑马鱼DNA、所述不含CpG位点的斑马鱼DNA为权利要求1~11任一项中的幼斑马鱼DNA、不含CpG位点的斑马鱼DNA所定义；

所述灵长类动物靶核酸为权利要求2或3中的靶核酸所定义。

13.根据权利要求12所述的预处理方法，其特征在于，所述灵长类动物靶核酸来自如下样本：血液、血清、血浆、尿液、粪便、唾液、痰液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、鼻咽拭子、宫颈刮片、精液、细胞培养液。

14.根据权利要求12所述的预处理方法，其特征在于，所述灵长类动物靶核酸来自组织或组织裂解液。