[发明专利]用于产生由单分子DNA形成的环状DNA的方法有效
| 申请号： | 201180042478.5 | 申请日： | 2011-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN103119162A | 公开（公告）日： | 2013-05-22 |
| 发明（设计）人： | 水野晋一;长藤宏司;冈村孝 | 申请（专利权）人： | 学校法人久留米大学 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 彭鲲鹏;卢蓓 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 日本;JP |
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| 摘要： | 本发明提供了用于产生环状DNA的方法，所述环状DNA由单分子DNA形成的环状DNA组成，并且其不包括由多分子DNA形成的环状DNA。根据本发明的方法，可以可靠地产生仅由单分子DNA形成的环状DNA分子。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 产生 分子 dna 形成 环状 方法 | ||
【主权项】：
一种用于产生环状DNA的方法，所述环状DNA仅由单分子DNA形成的环状DNA组成，并且其不包含由多分子DNA形成的环状DNA，所述方法包括以下步骤：1)使每个目标DNA分子的一端与用于第一环化的适配体(A)结合并且使其另一端与用于第二环化的包含适配体(b)和适配体(A)的适配体(B)结合的步骤，其中适配体(B)通过适配体(b)侧与所述DNA分子结合，从而使得适配体(B)中的适配体(A)位于所述DNA分子与适配体(b)之键的外侧，其中适配体(A)包含切割位点，所述切割位点产生与适配体(A)的全部切割末端非特异性结合的切割末端，和适配体(b)包含切割位点，所述切割位点产生仅与相同适配体(b)的切割末端特异性结合的切割末端；2)在适配体(A)的切割位点切割在步骤1)中得到的DNA分子的第一切割步骤；3)使在步骤2)中得到的DNA分子的两端结合以环化所述DNA分子的第一环化步骤；4)除去步骤3)中未环化的线性单分子和多分子结合之DNA的步骤；5)在适配体(b)的切割位点切割在步骤3)和步骤4)中得到的环状DNA分子的第二切割步骤；和6)使在步骤5)中得到的DNA分子的两端结合以环化所述DNA分子的第二环化步骤。
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