[发明专利]黑木耳凝集素的提取方法

权利要求书

1.黑木耳凝集素的提取方法，其特征在于所述黑木耳凝集素的提取方法按照以下步骤进行：

一、称取干燥的黑木耳5g，加入100mL的磷酸盐缓冲液，在捣碎机中充分搅碎至粘稠的匀浆，每5min搅碎2次，两次之间将黑木耳匀浆放入冰浴中制冷3min，将黑木耳匀浆以5000r/min冷冻离心30min，收集上清液后采用四层FN15膜高压过滤，滤液为黑木耳凝集素粗提液3MTHS1-0；

二、将25mL 3MTHS1-0与25mL猪胃粘蛋白II型-溴化氰活化的琼脂糖凝胶4B充分混合，于6℃搅拌过夜，次日以3000r/min离心5min，得到上清液3MTHS1-1；

三、将步骤二离心后的下层液分别用10mLPBS缓冲液洗三次，以3000r/min离心速率离心5min，弃去上清液；

四、解离：向步骤三所得的溶液中加入10mL甘氨酸浓度为0.1mol/L、NaCl浓度为1mol/L、pH值为3.0的溶液，充分摇匀10min，以3000r/min离心速率离心5min，在得到的上清中加入Tris-HCl缓冲溶液；

五、重复步骤四三次，并将三次得到的溶液合并，得到溶液3MTHS1-2；

六、向步骤四中弃去上清液后的溶液中加入2ml浓度为1mol/L、pH值为7.8的Tris-HCl缓冲溶液和25mLPBS缓冲溶液，以3000r/min离心5min，清洗2次；

七、将3MTHS1-1按照步骤二-步骤五的步骤重复提取，得到提取液1；

八、将3MTHS1-0按照步骤二-步骤五的步骤重复提取，得到提取液2；

九、将提取液1、提取液2和溶液3MTHS1-2合并，进行5kDa超滤除盐，凝缩至2mL，再用10kDa的超滤离心管以4400r/min继续超滤至0.5mL，超滤过程中加水除盐3次，冷冻干燥，即得黑木耳凝集素。

2.根据权利要求1所述黑木耳凝集素的提取方法，其特征在于步骤一中所述磷酸盐缓冲液浓度为10mmol/L、pH值为7.6。

3.根据权利要求1所述黑木耳凝集素的提取方法，其特征在于步骤四中按照每10mL上清中加入1mL Tris-HCl缓冲溶液的比例加入Tris-HCl缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述黑木耳凝集素的提取方法，其特征在于步骤四中所述Tris-HCl缓冲溶液浓度为1mol/L、pH值为7.8。