[发明专利]辣椒和番茄细菌性疮痂病菌MLST分子分型方法

权利要求书

1.一种用于辣椒和番茄细菌性疮痂病菌分子分型的扩增引物对组合，其特征在于：所述扩增引物对组合中各引物对序列为：

glnA1: TCATCTTCGATTCGGTGCG

glnA2:AGGCGCTTGTAGCTGTTGG

trpB 1:CCATGTAGACCACGCATTCCA

trpB2: GCCCATCAGTGACTTTTACGC

aroE1:CGCAGGTCTTCGATGTAACGC

aroE2: CCTGTCGCCCATTCGCTGT

gltA1: ACCTTGTGGGTCATCTCGC

gltA2: GGCCGCCATCCGTTTGA

leuA1:ACGACCGTATCCAACCAGACC

leuA 2: TGGTGAAGCCGACCGTGT

petC 1: GAACAGGACCACCCATACGC

petC 2: CGGCTGCCATTCGTTGA

adk1: GCCTTGCTGATGCGTTCCA

adk2: CCCAGGCGACACGTCTCAA。

2.一种利用权利要求1所述的引物对组合进行辣椒和番茄细菌性疮痂病菌分子分型的方法，其特征在于：其中所述分子分型是将4种辣椒和番茄细菌性疮痂病菌进行分型，即：group1属于Xanthomonas euvesicatoria，标准菌株为ICMP98；group2组属于X. perforans，标准菌株为ICMP16690；group 3组属于X. vesicatoria，标准菌株为ICMP63；group 4组属于 X. gardneri，标准菌株为ICMP16689，该方法用所述引物对组合对样品进行PCR扩增，将扩增产物进行检测和测序，用软件进行序列比对，获得菌株序列型，在线采用eBURSTV3程序进行序列型分析，可将所述4种病原菌有效区分。

3.如权利要求2所述的方法，其中PCR扩增的50 μL反应体系如下：

ddH₂O 36μl

含Mg²⁺的10×PCR buffer 5 μL

2.5 mM dNTPs 4 μL

10 μM 正向Primer 1 μL

10 μM 反向Primer 1 μL

5U/μl Taq DNA聚合酶 1 μL

10~50 ng/μl DNA模板 2 μL

PCR反应条件为：预变性温度95℃，5min；变性温度95℃，30 s；退火温度60℃，30 s；延伸温度72℃，30 s；一共32个循环，最后延伸的温度是72℃，5 min。