[发明专利]转基因大豆GTS40-3-2核酸定量检测的质粒标准分子

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物工程技术领域的质粒分子，具体来说，涉及一种转因大豆GTS40-3-2定量检测用质粒标准分子及其构建与定量方法。

背景技术

转基因生物技术被称为是“应用最为迅速的生物技术”，随着生物技术的不断发展，越来越多的转基因植物应用于农业领域，促进农业生产，帮助农民增收，为解决全球人口增长所带来的粮食问题开辟了新的途径。所谓转基因植物(Genetically modified organism，GMO)是指利用生物技术，将从不同生物中分离或人工合成的基因在体外进行重组，然后导入受体植物细胞，使新的基因在受体细胞内整合、表达、其再生植株能通过无性或有性增殖过程，将外源基因遗传给后代，由此获得的遗传修饰植物类型称为转基因植物。以转基因植物直接为食品或为原料加工生产的食品称为转基因食品。转基因技术将基因在不同物种之间转移，改造生物的遗传物质，使其在性状、营养品质、消费品质等方面向人类所需要的目标转变，满足人类的各种需求，例如提高产量、表达特殊营养成分甚至获得抗除草剂抗病毒或抗虫害的能力。例如转基因大豆是全世界种植面积最大的转基因作物，转基因大豆主要是导入了抗草甘膦基因EPSPS基因(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase)该基因编码磷酸烯醇式丙酮酰莽草酸合成酶，使大豆能够耐受除草剂草甘膦的伤害，大大方便大豆农业生产和管理。

但是随着转基因作物在全世界范围内的广泛种植，其食用安全和环境安全问题也引起了广大消费者和各国政府及相关机构人员的重视。转基因作物在实验室内产生，是大跨度、跳跃式的转移基因，不同于漫长的自然选择和相近物种的杂交。在理论上，转基因作物的产生是人为的加快了某些物种的生物进化速度。这些物种没有经过长期的自然选择的过程，其本身的安全性未知，并且对已有生物的多样性会产生影响。因此很多国家和地区纷纷制定转基因生物安全管理法规，实施标签制度，并积极发展转基因作物检测监测技术。

应用于转基因检测方法主要有两种：核酸检测、蛋白质检测。其中核酸检测方法由于检测灵敏度高、适用范围广、操作简便等原因已经成为转基因植物及其产品的主要检测方法。另外核酸由于在生物细胞中含量相对稳定，在产品加工中也相对不容易被破坏，因此常用作转基因植物及其产品的检测目标。

荧光定量聚合酶链式反应(real-time Fluorescent Quantitative PCR，FQ-PCR)方法是聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)技术的一种，是公认的目前核酸检测的最常用定量检测方法。聚合酶链式反应又称体外基因扩增技术，是一项在短时间内体外大量扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。近年来出现的核酸定量PCR技术，尤其是实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术，实现了PCR由定性到定量的飞跃。实时荧光定量PCR技术在PCR反应体系中加入能特异标记PCR产物的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。实时荧光定量PCR技术是在PCR定性技术基础上发展起来的一种核酸定量和分析技术，该技术融会了PCR的高灵敏性、DNA杂交技术的高特异性和光谱技术的高精确定量优点，且操作简便、污染少，已成为分子生物学等许多研究及应用科学中的重要工具。

在实际检测中，标准物质十分重要。目前，国内用于转基因生物检测的标准物质还很少，目前只有一种转基因大豆粉末标准物质。国际领先的生物计量单位或者实验室已经开始进行转基因定量PCR检测用标准物质的研制，例如位于比利时的欧盟联合研究中心下属的标准物质与测量研究所(IRMM)，已经配制并提供涉及14种转基因作物的有证标准物质(CRMs)系列标准品60多种，这些标准品已经在市场上销售，但国际有证标准物质的价格居高不下，不能满足日益增多的转基因检测的需求。并且，现有的这些标准物质多是原始农产品植物材料的植株或者种子等组织器官的干燥粉末，在使用中还需要从中提取DNA，制备、贮存和测定过程因素影响众多，很难维持恒定的量，很难保证测量的稳定性，溯源性差。