[发明专利]转基因大豆GTS40-3-2核酸定量检测的质粒标准分子

权利要求书

1.一种转基因大豆GTS40-3-2的质粒标准分子，其特征在于，含有转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列、品系特异性序列及大豆内标准基因Lectin的特异性片段。

2.如权利要求1所述的转基因大豆GTS40-3-2的质粒标准分子，其特征在于，所述的转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列是部分35S启动子序列、CTP4序列以及部分CP4 EPSPS序列所组成的核苷酸片段；所述的转基因大豆GTS40-3-2的品系特异性序列是转基因大豆GTS40-3-2外源插入载体以及与该外源插入载体相邻接的大豆基因组序列所组成的核苷酸片段，所述的“部分”是50-500bp的长度；其特征在于，所述的大豆内标准基因Lectin是大豆凝集素基因。

3.一种如权利要求1或2所述的转基因大豆GTS40-3-2的质粒标准分子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①利用引物通过PCR特异性扩增转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列、品系特异性序列及大豆内标准基因Lectin的特异性片段；

②分别依次将PCR扩增得到的转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列、品系特异性序列及大豆内标准基因Lectin的特异性片段克隆至克隆载体上，得到质粒标准分子pXL02。

4.如权利要求3所述的转基因大豆GTS40-3-2的质粒标准分子的制备方法，其特征是，所述的转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列是部分35S启动子序列、CTP4序列及部分CP4 EPSPS序列所组成的核苷酸片段；所述的转基因大豆GTS40-3-2的品系特异性序列是转基因大豆GTS40-3-2外源插入载体以及与该外源插入载体相邻接的大豆基因组序列所组成的核苷酸片段；所述的大豆内标准基因Lectin是大豆凝集素基因。

5.如权利要求3所述的转基因大豆GTS40-3-2定量检测的质粒标准分子的制备方法，其特征是，所述的特异性扩增是利用设计的PCR引物特异性扩增转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列、品系特异性序列及大豆内标准基因Lectin的特异性片段。

6.如权利要求3所述的转基因大豆GTS40-3-2定量检测的质粒标准分子的制备方法，其特征是，所述的克隆是将上述PCR扩增得到的转基因大豆GTS40-3-2的结构特异性序列、品系特异性序列及大豆内标准基因Lectin的特异性片段依次连接到质粒载体上，获得标准质粒分子pXL02。

7.一种如权利要求1或2所述的转基因大豆GTS40-3-2的质粒标准分子的定量方法，其特征在于，包括以下步骤：

①提取质粒标准分子pXL02；

②根据步骤①所得的质粒标准分子pXL02的碱基组成和序列长度，计算质粒标准分子pXL02分子中的磷元素的含量；

③配制梯度浓度的磷标准溶液，并用此标准溶液作出电感耦合等离子体发射质谱(ICP-MS)的标准曲线。

④ICP-MS检测质粒标准分子pXL02溶液，并根据步骤③所得的标准曲线得出质粒标准分子pXL02溶液的磷含量。

⑤根据步骤④所得的质粒标准分子pXL02溶液的磷含量和步骤②所得的质粒标准分子pXL02分子中的磷元素的含量，计算出质粒标准分子pXL02的浓度。

8.如权利要求7所述的所述的转基因大豆GTS40-3-2的质粒标准分子的定量方法，其特征是，ICP-MS参数如下：RF power为1100W，雾化气流量为1.08L/min，辅助气流量为1.2L/min，等电子体气流量为16L/min。

9.一种转基因大豆GTS40-3-2的核酸定量PCR检测方法，其特征是，所采用的标准物质是如权利要求1或2所述的质粒标准分子。

10.如权利要求1或2所述的质粒标准分子在转基因大豆GTS40-3-2的核酸定量PCR检测中的应用。