[发明专利]一种利用DNA甲基化的方法检测苯丙酮尿症的试剂盒

权利要求书

1.一种利用DNA甲基化的方法检测苯丙酮尿症的试剂盒，包括dNTP、10xPCR buffer、MgCl₂、ddH₂O、Taq DNA聚合酶，其特征在于，还包括标准血液DNA、引物MSP-R、引物MSP-L、引物UMSP-R、引物UMSP-L、引物BSP-R1、引物BSP-L1、引物BSP-R2、引物BSP-L2；所述引物MSP-R的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1所示，引物MSP-L的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.2所示，引物UMSP-R的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.3所示，引物UMSP-L的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.4所示，引物BSP-R1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.5所示，引物BSP-L1的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.6所示，引物BSP-L2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.7所示，引物BSP-R2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.8所示；上述引物用于做甲基化特异性PCR，PCR时，引物的配对方案为：

引物MSP-R、MSP-L配对，引物UMSP-R、UMSP-L配对，引物BSP-R1、BSP-L1配对，引物BSP-R2、BSP-L2配对，用于检测ASS基因(GeneBankNG_011542，精氨酸代琥珀酸合成酶基因)启动子区甲基化情况。

2.根据权利要求1所述一种利用DNA甲基化的方法检测苯丙酮尿症的试剂盒，其特征在于，所述标准血液DNA为取自无苯丙酮尿症健康人血液提取的基因组DNA并经过重亚硫酸盐处理。

3.一种利用DNA甲基化的方法检测苯丙酮尿症的标志物，其特征在于，所述标志物为ASS基因(GeneBank NG_011542，精氨酸代琥珀酸合成酶基因)甲基化的启动子区域，该区域包括一个或多个甲基化的CpG岛；所述ASS(GeneBankNG_011542，精氨酸代琥珀酸合成酶基因)基因甲基化的启动子区域核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.9、SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示。

4.权利要求1所述利用DNA甲基化的方法检测苯丙酮尿症的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)从血液样品中提取基因组DNA；

(2)将基因组DNA经重亚硫酸盐处理，使未甲基化的胞嘧啶全部转变为尿嘧啶；

(3)利用权利要求1所述试剂盒及引物配对方案，以ddH₂O、标准血液DNA、经重亚硫酸盐处理的血液样品基因组DNA为模板，进行甲基化特异性PCR反应；

(4)用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果，如果以ddH₂O、标准血液DNA为模板的PCR无扩增条带，而以经重亚硫酸盐处理的血液样品基因组DNA为模板的PCR扩增有扩增条带，且扩增条带与预测的条带大小一致，则认为所检测的血液样品来自苯丙酮尿症患者。