本发明提供了一种检测番鸭呼肠孤病毒和新型番鸭细小病毒的引物探针组合,属于畜禽疾病诊断技术领域,包括引物对和探针,所述引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,所述引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;所述探针包括番鸭呼肠孤病毒探针和新型番鸭细小病毒探针,所述番鸭呼肠孤病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示,所述新型番鸭细小病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No采用本发明提供的引物探针组合能够对引起种鸭跛行的番鸭呼肠孤病毒和新型番鸭细小病毒进行快速鉴别诊断。
本发明公开了一种用于检测番鸭呼肠孤病毒的单链抗体、嵌合抗体和双夹心ELISA检测试剂盒,所述单链抗体的序列如SEQ ID No:1所示。所述嵌合抗体包括所述的单链抗体和鸭IgG恒定区Fc段基因。所述双夹心ELISA检测试剂盒包括包被有捕获抗体的酶标板、检测抗体和酶标抗体;其中,所述捕获抗体为如上所述的嵌合抗体;所述检测抗体为鼠抗番鸭呼肠孤病毒多克隆抗体;所述酶标抗体为HRP标记的羊抗鼠IgG。本发明通过提供一种特异性识别番鸭呼肠孤病毒的抗体,并在此基础上通过鸭IgG恒定区Fc段基因进行修饰,降低排斥作用,提高重组后的嵌合抗体对于抗原的针对性识别,提高对番鸭呼肠孤病毒识别的敏感性。
本发明涉及用于番鸭呼肠孤病毒、鹅呼肠孤病毒和新型鸭呼肠孤病毒鉴别检测的三重RT‑PCR引物组及其试剂盒,引物组的序列如SEQ ID NO.1‑6。本发明建立了对三种水禽呼肠孤病毒的三重RT‑PCR检测方法,引物设计及反应条件的优化是多重PCR成功建立的关键技术,多重PCR主要存在的问题是扩增效率不均衡。
本发明公开了一种新型鸭呼肠孤病毒弱毒株,其具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的σC结构蛋白。本发明还公开了包含上述新型鸭呼肠孤病毒弱毒株的疫苗。本发明还公开了上述新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在制备预防新型鸭呼肠孤病毒病的产品中的应用。本发明新型鸭呼肠孤病毒弱毒株,制备的新型鸭呼肠孤病毒病的活疫苗,在免疫1日龄健康易感雏鸭后,6日后对强毒攻击的保护率达到100%,具有良好的安全性和有效性,且在易感鸭体内人工传代不发生毒力返强,对雏鸭新型鸭呼肠孤病毒病的防治具有非常好的应用前景
本发明公开了一种用于鉴定新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒及其应用,该试剂盒基于SEQ ID NO:3所示的探针和SEQ ID NO:1~2所示的引物对构成。基于该检测试剂盒的检测方法检测速度快且高通量,对于新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒具有较好的特异性,对于新型鸭呼肠孤病毒的最低检测限可达到17.8copies,对于新型鹅呼肠孤病毒的最低检测限可达到35.3copies该检测方法对于新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的监测和防控具有极为重要的意义。