本发明涉及一种鉴别番鸭细小病毒标准强毒P株和疫苗弱毒P1株的ARMS‑PCR检测的引物组，所述引物组的序列如SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:6所示，本发明建立的相应ARMS‑PCR检测方法可以特异鉴别番鸭细小病毒标准强毒P株及其疫苗弱毒P1株，而与番鸭的其他重要病原无交叉反应。本发明的引物特异性好，敏感性高，整个ARMS‑PCR过程可以在2h内完成，并且通过番鸭细小病毒标准强毒P株和疫苗弱毒P1株VP1基因第942、第1150位核苷酸点突变进行SNP分型检测，仅需一次PCR扩增和一次琼脂糖电泳即可达到明确番鸭群番鸭细小病毒弱毒疫苗的预防免疫以及强毒感染的进程。
本发明涉及一种用于靶向敲除鸭cGAS基因的sgRNA及其应用，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.2所示，所述sgRNA对应的互补链序列如SEQ ID NO.3所示。本发明利用特异性靶向敲除鸭cGAS基因的sgRNA重组慢病毒质粒cGAS‑pSpCas9(BB)‑2A‑Puro(PX459)，利用CRISPR/Cas9系统达到基因位点精准敲除，通过药物筛选获得稳定敲除鸭cGAS基因的细胞株，并利用测序验证鸭cGAS基因的敲除效果。本发明提供的sgRNA能精准敲除鸭cGAS基因，为cGAS在水禽抗病毒天然免疫中的功能研究奠定基础。
本发明涉及用于番鸭呼肠孤病毒、鹅呼肠孤病毒和新型鸭呼肠孤病毒鉴别检测的三重RT‑PCR引物组及其试剂盒，引物组的序列如SEQ ID NO.1‑6。本发明的三重PCR反应，3组引物的添加量比为0.55：0.3：0.4。本发明建立了对三种水禽呼肠孤病毒的三重RT‑PCR检测方法，引物设计及反应条件的优化是多重PCR成功建立的关键技术，多重PCR主要存在的问题是扩增效率不均衡。本发明在引物选择上将片段大小的差距缩小，在引物筛选环节，设计了多对引物用于扩增MDRV、GRV和NDRV，最后筛选出扩增片段大小相近的3对引物，从而有效减少了扩增效率不均衡的影响，电泳结果表明目的条带准确、清晰、区分度强。
本发明公开了鉴别番鸭小鹅瘟病毒基因重组变异毒株、番鸭小鹅瘟病毒弱毒疫苗毒株和鹅细小病毒经典毒株的三重PCR引物组，包括三对特异性引物，分别具有如序列表SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.6所示的序列。发明人建立了相应的三重PCR检测方法，该法可以特异检测番鸭小鹅瘟病毒基因重组变异毒株、番鸭小鹅瘟病毒弱毒疫苗毒株和鹅细小病毒经典毒株，而与番鸭的其他重要病原无交叉反应。临床检测结果表明，本发明的引物特异性高、且片段小，敏感性高，可同时检测并区分MDGPV基因重组变异毒株、MDGPV弱毒疫苗毒株和鹅细小病毒经典毒株，为临床快速鉴别MDGPV及其流行病学调查提供了有效的技术平台。
