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[发明专利]一种多重置换扩增反应液、扩增方法及试剂盒-CN202310879536.4在审
发明人：郑文山;张孝瑾 -专利权人：墨卓生物科技（浙江）有限公司
申请日： 2023-07-18 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种多重置换扩增反应液、扩增方法及试剂盒，所述反应液的制备原料包括：10X DNA扩增缓冲液、引物、2.5mM脱氧核糖核苷酸三磷酸、扩增酶、胎牛血清、灭菌水、扩增用核酸染料，针对目前液滴内调节全基因组扩增方法操作复杂、检测浓度有下限、对单微生物包裹率不明确等问题，本发明采用生物酶及染料共同扩增的方法，研发了一套操作简洁、成本低的观察单个微生物扩增后DNA浓度的技术，其扩增效率高
一种多重置换扩增反应方法试剂盒

[发明专利]一种高效的大片段DNA合成与扩增的PCR引物、方法及应用-CN202111051247.2在审
发明人：刘耀光;陈乐天;赵哲;谢先荣;刘伟智;祝钦泷;谭健韬 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2021-09-08 - 公布日： 2021-12-24 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效、特异地合成与扩增大片段DNA的PCR引物、方法及应用。本发明通过特别设计扩增引物，在正向引物和反向引物5'端添加相同的任意短序列，使扩增序列的单链DNA末端形成反向重复序列并配对产生发夹结构，对引物二聚体和短小的非特异DNA片段的扩增有良好的抑制效果；而较大的目标DNA片段末端难以相互配对不产生发夹结构，因而可避免非特异产物的竞争而被高效地特异性扩增。进一步，本发明使用嵌套式交错变温内循环，可优化目标序列的不同GC含量区间的有效延伸，与上述抑制效果的倍加效应最终提高PCR的扩增效率和特异性；本发明可提高大片段DNA序列从头合成的能力，从不同物种的基因组等各种模板扩增大片段目标DNA，扩增的DNA片段可应用于载体克隆、表达和基因组测序等目的，在分子生物学、合成生物学和生物技术领域具有重要的应用价值。
一种高效片段 dna 合成扩增 pcr 引物方法应用

[发明专利]一种单细胞全基因组的扩增方法及其应用-CN202210248299.7在审
发明人：杨玥尧;赵丁丁;冒燕;孔令印;梁波 -专利权人：苏州贝康医疗器械有限公司
申请日： 2022-03-14 - 公布日： 2022-05-31 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种单细胞全基因组的扩增方法及其应用，所述单细胞全基因组的扩增方法包括以下步骤：(1)采用核酸切刻内切酶处理扩增模板，使用恒温扩增酶进行恒温扩增，得到单链DNA；(2)纯化步骤(1)所得的单链DNA，使用DNA聚合酶和随机引物扩增形成互补链。所述单细胞全基因组的扩增方法能够兼顾高保真性和均一性，且能同时满足SNP和CNV的分析需求。所述单细胞全基因组的扩增方法的酶切速率高，在切口的同时进行等温扩增，扩增效率高，扩增产物的产量大；扩增反应条件为恒温条件，对仪器的要求低，使用操作简单快捷，方法易于推广。
一种单细胞基因组扩增方法及其应用

[发明专利]基于特异性SS-COI引物的棉黑蚜PCR快速检测方法-CN201410697874.7在审
发明人：王冬梅;丁瑞丰;刘建;李海强;李号宾;徐遥;阿克旦;汪飞;李广阔 -专利权人：新疆农业科学院植物保护研究所
申请日： 2014-11-19 - 公布日： 2015-06-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：基于特异性SS-COI引物的棉黑蚜PCR快速检测方法，是根据棉黑蚜特有的mtDNA COI序列，设计了一对棉黑蚜特异性的COI引物Aa105-1F和Aa105-1R，该引物只对棉黑蚜具有特异性扩增效果，扩增产物大小为210bp，DNA最低检出浓度为0.192ng/μL。
基于特异性 ss coi 引物棉黑蚜 pcr 快速检测方法

[发明专利]干细胞微球组及干细胞的体外扩增方法和应用-CN202110387729.9有效
发明人：马少华;曹远雄;徐冰;赵浩然;王子天 -专利权人：清华大学深圳国际研究生院
申请日： 2021-04-12 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12N11/04 文献下载
摘要：本发明公开了干细胞微球组及干细胞的体外扩增方法和应用。第一微球内的高密度干细胞表现出较为明显的高增殖和高迁移率特性，在这种情况下，将第一微球分散于培养基质中，得到相应的干细胞微球组，第一微球之间的间隙可以为其中的干细胞的生长、迁移创造良好的外部环境，实现干细胞微球的扩增效用最大化，在有限数量干细胞的情况下，达到更好的扩增效果。
干细胞微球组体外扩增方法应用

[发明专利]用于MDRV、GRV和NDRV鉴别检测的三重RT-PCR引物组及其试剂盒-CN202310767586.3在审
发明人：陈仕龙;胥焯然;陈少莺;程晓霞;王劭;郑敏;肖世峰 -专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2023-06-27 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明建立了对三种水禽呼肠孤病毒的三重RT‑PCR检测方法，引物设计及反应条件的优化是多重PCR成功建立的关键技术，多重PCR主要存在的问题是扩增效率不均衡。本发明在引物选择上将片段大小的差距缩小，在引物筛选环节，设计了多对引物用于扩增MDRV、GRV和NDRV，最后筛选出扩增片段大小相近的3对引物，从而有效减少了扩增效率不均衡的影响，电泳结果表明目的条带准确
用于 mdrv grv ndrv 鉴别检测三重 rt pcr 引物及其试剂盒

[发明专利]一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组、试剂盒及利用其测序的方法-CN202110613785.X在审
发明人：李中波;罗世民;文银容;向桑 -专利权人：怀化职业技术学院
申请日： 2021-06-02 - 公布日： 2021-08-27 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本申请属于生物基因技术领域，尤其涉及一种扩增白纹伊蚊nad1基因的引物组，所述引物组包括白纹伊蚊nad1基因的上游引物和下游引物，且所述上游引物Ab‑nad1‑F:5’‑TATCATAACNAAACCGAGGC‑3’；所述下游引物Ab‑nad1‑R:5’‑TTAGTAGTTTGTGTAATAGTAGGAGTAGC‑3’；其中，所述“N”表示选自A、T、G和C中的一个碱基，所述引物组能特异性地扩增白纹伊蚊nad1基因，利用该引物组和/含有该引物组的试剂盒对待测模板DNA扩增得到PCR扩增产物后进行下一步地检测和测序，能够快速、准确地识别白纹伊蚊，并精准地获得白纹伊蚊nad1基因序列，本方法简单易行且能够有效检测扩增效果
一种扩增白纹伊蚊 nad1 基因引物试剂盒利用方法

[发明专利]一种基于RPA-侧流层析技术检测栗黑水疫霉的引物和探针组合及其应用-CN201910361142.3在审
发明人：戴婷婷;陆辰晨;焦彬彬;汪澳华 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2019-04-30 - 公布日： 2019-07-30 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于重组酶介导等温扩增‑侧流层析技术(RPA‑LFD)检测栗黑水疫霉(Phytophthora cambivora)的引物及探针组合及其应用。采用所述引物及探针组合检测栗黑水疫霉(P.cambivora)的具体方法为：1)提取待测样本DNA；2)以DNA为模板，进行RPA扩增；3)应用侧流层析试纸条进行扩增产物检测。本发明所使用的引物及探针组RPA扩增效果好，条带特异性强，与其他病菌无交叉反应，在质控区有阳性对照，增加了检测的灵敏性，为栗黑水疫霉(P.cambivora)的检测提供了新的技术平台，同时适用于栗黑水疫霉病菌寄主苗木
黑水疫霉引物检测探针组合侧流层析技术病菌应用扩增产物检测层析试纸条待测样本等温扩增技术平台寄主苗木交叉反应扩增效果特异性强阳性对照植物材料灵敏性探针组质控区重组酶介导扩增条带土壤

[发明专利]适用于刺参的免提DNA的PCR快速扩增方法-CN201510019776.2有效
发明人：董志国;陈百尧;张庆起;赵帅;伏光辉;安健;张立祥 -专利权人：淮海工学院;连云港市高公岛黄窝捕捞养殖公司;连云港赣榆佳信水产开发有限公司;连云港市海洋与水产科学研究所
申请日： 2015-01-15 - 公布日： 2015-04-08 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：PCR快速扩增方法，其步骤是将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液0.02-1?L入200?L?L体系下的PCR扩增反应条件为普通PCR条件，扩增程序为94?℃预变性4?min；94?℃变性40?s，50-60?℃退火40?s，72?℃延伸40?s，共35个循环；72?℃延伸6?min，4?本发明方法设计简便合理，可操作性强，无需经过DNA抽提过程，即可获得理想的扩增效果。
适用于刺参免提 dna pcr 快速扩增方法

[发明专利]一种造血干/祖细胞的体外扩增体系-CN201210087227.5有效
发明人：韩骅;梁英民;田登梅 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2012-03-29 - 公布日： 2012-08-22 - 主分类号： C12N5/0789 文献下载
摘要：本发明提供一种血管内皮细胞靶向的Notch配体的可溶性融合蛋白人Dll1-RGD（hDll1-RGD）体外扩增人脐血的造血干/祖细胞的体外扩增体系，是以人脐静脉内皮细胞作为培养体系的支持细胞，联合应用外源性生长因子SCF、TPO、FL、IL-6、IL-3及自行研发的hDll1-RGD，与造血干/祖细胞共培养，构成了一种体外扩增的有效体系。在本发明中通过hDll1-RGD靶向结合于脐静脉内皮细胞表面，向造血干细胞提供针对Notch受体的激活型刺激，维持造血干细胞的自我更新和增殖，从而获得了满意的扩增效果及良好的植入能力。
一种造血细胞体外扩增体系

[发明专利]基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用-CN202011538952.0有效
发明人：俞英豪;王冶陶;彭昉;蔡燕萍 -专利权人：杭州中赢生物医疗科技有限公司
申请日： 2020-12-23 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用。本发明利用异体原核生物作为滋养层细胞，通过基因工程手段获表达CD137L、IL21和CD4中至少一种蛋白的基因工程细菌，将该基因工程细菌表达用于扩增淋巴细胞，具有扩增效率高、安全性好的优点，且成本更低。实现结果表明，利用本发明基因工程细菌扩增纯化的NK细胞或未经纯化的淋巴细胞，NK细胞14天分别增长25892.99倍、30150.22倍。其中，对未经纯化的淋巴细胞进行培养，获得NK细胞的纯度达98.5％，显著优于传统因子培养以及现有滋养细胞技术的培养效果。
基因工程细菌及其淋巴细胞扩增中的应用

[发明专利]融合蛋白及其表达细胞株与应用-CN202210138425.3有效
发明人：张玲洁;陈爱华 -专利权人：广东香雪干细胞再生医学科技有限公司
申请日： 2022-02-15 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明通过基因工程改造将融合蛋白(IL‑15、IL‑18、L‑21、IL‑2和4‑1BBL)表达在饲养层细胞表面，再裂解细胞形成抗原复合物，共培养可加强该蛋白对NK细胞的激活扩增效果。实验表明，无论是来源异体(异体外周血/脐血)或自体血，采用本发明方案均能稳定刺激扩增出高纯度高杀伤活性的NK细胞，通过体外采集分离，刺激扩增培养后NK细胞(CD3‑CD16+CD56+、NKG2D)平均能达到纯度90％以上，活化受体大幅度上升，NK细胞扩增倍数上千倍，杀伤活性高。
融合蛋白及其表达细胞株应用

[发明专利]酸土环脂芽孢杆菌检测试剂盒及其检测方法-CN201210206854.6无效
发明人：周赞虎;张海艳;蔡开珍;李可;郑俊超 -专利权人：周赞虎
申请日： 2012-06-21 - 公布日： 2012-10-17 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：所述酸土环脂芽孢杆菌检测试剂盒包括：环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂。检测酸土环脂芽孢杆菌的方法使用所述酸土环脂芽孢杆菌检测试剂盒，具体步骤：细菌DNA的提取：环介导等温扩增；显色检测。利用4条特殊设计的引物及具有链置换活性的Bst DNA聚合酶，在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA，在1h内能达到109靶序列拷贝，可通过荧光染料来观察扩增效果。
酸土环脂芽孢杆菌检测试剂盒及其方法

[发明专利]一种Hcy代谢关键酶的快速检测试剂盒及检测方法-CN201810126725.3在审
发明人：王花;孙力强;孙正扬;孙正明 -专利权人：新开源云扬（广州）医疗科技有限公司
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2018-10-09 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种Hcy代谢关键酶的快速检测试剂盒及检测方法，其中，所述试剂盒由高效扩增组和焦磷酸测序组组成，其中高效扩增组包括特异性扩增引物，待扩增的模板序列包含在如序列表SEQ ID NO:1所示的序列中，高效扩增组用于待扩增模板的线性指数PCR扩增；扩增产物退火后经焦磷酸测序组测序，焦磷酸检测组包括：退火引物、DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和Klenow酶。本发明采用本发明采用线性指数扩增的目标片段扩增方法，精准设计的扩增引物扩增效率高且错配少，直接扩增出单链DNA可直接用于焦磷酸测序，无需对扩增产物进行标记和双链分离，避免了繁冗的实验步骤，也减少了强碱性试剂对扩增片段的损伤
扩增焦磷酸测序快速检测试剂盒退火扩增产物线性指数关键酶代谢特异性扩增引物强碱性试剂扩增模板扩增片段扩增效率扩增引物模板序列目标片段实验步骤荧光素酶单链DNA 检测组焦磷酸试剂盒检测测序错配双链引物损伤

[发明专利]一种用于从血浆中直接扩增艾滋病病毒基因组的核酸组合物及扩增测序方法-CN202011000351.4在审
发明人：孟哲峰;杜玲 -专利权人：上海市闵行区中心医院
申请日： 2020-09-22 - 公布日： 2020-12-15 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于从血浆中直接扩增艾滋病病毒基因组的核酸组合物及扩增测序方法。本申请采用三段式扩增策略，分析并选取三个扩增目的片段，第一个扩增子是gag‑pol扩增子，第二个扩增子是pol‑env扩增子，第三个扩增子是env‑nef扩增子，针对上述三个扩增子通过设计和筛选引物，最终获得了艾滋病病毒近全长基因组本发明的方法适用于HIV‑1B和BC毒株的近全长基因组扩增和测序，三扩增子策略的扩增效率达到65.6％，扩增后可获得75％的艾滋病病毒基因组序列，满足了我国HIV主要流行毒株的研究需求。
一种用于血浆直接扩增艾滋病病毒基因组核酸组合方法