本发明提供一种具有SEQ ID NO:1的核苷酸序列、具有SEQ ID NO:2的通用反向引物、通用反转录引物、引物设计方法以及miRNA检测方法。在miRNA检测方法中,使用所述通用反转录引物对miRNA样品进行cDNA合成,而所述通用反向引物用于在qPCR定量检测时进行所述cDNA分子扩增。所述引物设计方法使用所述通用反向引物序列、所述核苷酸序列及设计规则,以设计qPCR定量检测所用的引物。本发明的通用反转录引物、通用反向引物以及由引物设计方法所设计出的引物具有较佳的特异性及敏感度,同时兼具降低成本及方便使用的特性,且不需对引物进行额外修饰。