[发明专利]一种细胞制品中残余胰蛋白酶活性的检测方法在审
| 申请号： | 201510247424.2 | 申请日： | 2015-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN106282310A | 公开（公告）日： | 2017-01-04 |
| 发明（设计）人： | 韩忠朝;王斌;冯杰;韩之波;耿洁 | 申请（专利权）人： | 天津昂赛细胞基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/37 | 分类号： | C12Q1/37;C12Q1/02 |
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| 地址： | 300000 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种细胞制品中残余胰蛋白酶活性的检测方法，主要是利用胰蛋白酶可以催化N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐，水解成为N-苯甲酰-L-精氨酸盐酸盐和乙醇的特点，在水解后的反应体系中检测253nm波长处的吸光值，从而测定胰蛋白酶的活性。本发明设定了最佳反应温度为37℃和最佳检测时间在反应25分钟的时候，获得了一种新的胰蛋白酶活性检测方法，灵敏度更高，从而可用于细胞制品中残留胰蛋白酶活性的检测。因此，本发明是一种简单、灵敏、实用的检测细胞制品中残余胰蛋白酶活性的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 细胞 制品 残余 胰蛋白酶 活性 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种细胞制品中残余胰蛋白酶活性的检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)空白实验：取底物溶液2.5‑3.5ml，加入0.001mol/L盐酸溶液150‑250μl，混合均匀后，作为空白实验。(2)细胞制品残余胰蛋白酶活性的测定：取细胞制品溶液100μl，加入底物溶液2.5‑3.5ml和磷酸盐缓冲溶液80‑120μl后，立即计时并混合均匀，并在253nm处测定吸光度OD值A2，同时保持反应体系在36‑38℃；然后在反应25分钟的时刻点测定253nm处的吸光度OD值A1；A1‑A2代表了制品中残余的胰蛋白酶活性。
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- 任大海;尤政;王俊;王斌 - 清华大学
- 2015-04-22 - 2018-04-20 - C12Q1/37
- 本发明属于蛋白质检测领域，具体涉及一种基于能量转移的可用于活细胞内多种蛋白酶活性长时间实时并行检测的纳米探针。该探针的结构为“穿透肽‑量子点‑底物多肽‑纳米金颗粒”，它能高效率地进入细胞，且进入细胞的方式对细胞无伤害。此探针抗光漂白性能强，能长时间检测活细胞内的蛋白酶活性，可达一个月。它能够反映出蛋白酶在细胞内的分布，并实时反映出各待测蛋白酶被激活的时间，以及待测蛋白酶在细胞中表现出活性的次序。利用此探针能够更加全面地了解细胞中酶的特性，以及各种酶之间的相互影响。
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