本发明属于生物工程技术领域，具体涉及通过易错PCR技术进行随机突变获得在两种阴表面活性剂中稳定性提高的碱性蛋白酶突变体及其应用。所述碱性蛋白酶突变体为G95P/A96D/S99W/S101T/P127S/S126T/N212S突变体，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。在2％烷基苯磺酸AES存在情况下12h后的残余酶活达到85.9％，在2％烷基苯磺酸LAS存在情况下4h后的残余酶活达到61.2％。能够有效解决碱性蛋白酶在液体洗涤液中稳定性较低的问题。
本发明属于基因工程技术领域，公开了一种酶活和最适温度提高的脂肪酶融合蛋白，所述脂肪酶融合蛋白是在SEQ ID NO.2所示的野生型脂肪酶酶基础上，将RZⅠ蛋白添加到脂肪酶N端获得的，所述脂肪酶融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明利用蛋白质融合技术，在体外对扩展青霉来源的脂肪酶进行蛋白质融合，获得酶活和最适温度提高的脂肪酶融合蛋白。在国标法的反应条件下，RZⅠ‑WT的比酶活为188U/G，野生型脂肪酶WT的比酶活为138U/g，提高了36％。RZⅠ‑WT最适反应温度提高了5℃，最高比酶活为206U/g。
本发明属于生物工程技术领域，涉及工业微生物的育种，特别涉及一种生产碱性蛋白酶的底盘菌株及其构建方法与用途。本发明提供了一种地衣芽孢杆菌基因工程菌株，该基因工程菌株不表达地衣芽孢杆菌基因组上的chiAB，PulA，AmyA，spo0A，sigF，eps，pgs，lchAC以及核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的SacB基因，同时过表达碱性蛋白酶基因aprE。本发明从实验和生产中的实际情况出发，通过对基因工程宿主的改造简化，最终获得了一种能够高产碱性蛋白酶的底盘菌株，并且为构建蛋白酶高产底盘菌株提供了新的思路。
本发明属于工业酶制剂的洗涤用酶领域，具体涉及一种动性球菌来源的蛋白酶在制备洗涤产品中的应用。所述蛋白酶，具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，最适作用温度60℃，最适pH为8.0；Cu2+和Mn2+对该酶的活性有促进作用，该酶能够抵制DTT、EGTA、Urea对其的抑制作；与洗涤剂中的表面活性剂具有良好的兼容性，可以作为环保型添加剂应用到洗涤行业，同时洗涤剂中添加本发明提供的蛋白酶能提高洗衣液的去污能力。
本发明涉及一种能够表达碱性蛋白酶的双向启动子，所述双向启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。本启动子来源于一种地衣芽孢杆菌基因组，通过转录组分析预测方法获得；在新型启动子pLA和其反向启动子pLB调控转录下，克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶表达活性达到164U/mL和111U/mL，正义链启动子比已知强组成型启动子pShuttle‑09的表达活性提高了44％；从而为枯草芽孢杆菌表达系统中异源基因的表达提供一个新的方向，并推动蛋白酶的高效表达及工业化。
