[发明专利]NGR-VEGI融合蛋白及其编码基因与表达纯化方法有效
| 申请号： | 201310093142.2 | 申请日： | 2013-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN103160531A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 汪静;杨卫东;马温惠;邵亚辉;王喆;康飞;马晓伟;张英起;薛晓畅 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;A61K38/19;A61K47/48;A61P35/00 |
| 代理公司： | 西安创知专利事务所 61213 | 代理人： | 谭文琰 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种NGR-VEGI融合蛋白基因，其序列见SEQ ID NO.1，还公开了采用该基因编码的NGR-VEGI融合蛋白以及表达纯化NGR-VEGI融合蛋白的方法，该方法为：一、合成NGR-VEGI融合蛋白基因；二、构建得到融合蛋白原核表达载体；三、将融合蛋白原核表达载体转入大肠杆菌中进行融合蛋白的诱导表达；四、采用镍柱亲和层析进行分离纯化，得到NGR-VEGI融合蛋白。本发明通过设计NGR-VEGI融合蛋白基因，将NGR基序的肿瘤血管靶向性和VEGI较强的抗肿瘤血管生成作用结合在一起，采用高浓度的蛋白诱导表达方法，成功合成了NGR-VEGI融合蛋白，提高了VEGI在肿瘤组织的富集浓度。 | ||
| 搜索关键词： | ngr vegi 融合 蛋白 及其 编码 基因 表达 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种NGR‑VEGI融合蛋白基因，其特征在于，其序列如下： ATGGGCAGCA GCCATCATCA TCATCATCAC AGCAGCGGCC TGGTGCCGCG CGGCAGCCAT 60 ATGTGCAACG GCCGCTGCGT GAGCGGCTGC GCGGGCCGCT GCGGCAGCGG CCGCCAGACC 120 CCGACCCAGC ATTTTAAAAA CCAGTTTCCG GCGCTGCATT GGGAACATGA ACTGGGCCTG 180 GCGTTTACCA AAAACCGCAT GAACTATACC AACAAATTTC TGCTGATTCC GGAAAGCGGC 240 GATTATTTTA TTTATAGCCA GGTGACCTTT CGCGGCATGA CCAGCGAATG CAGCGAAATT 300 CGCCAGGCGG GCCGCCCGAA CAAACCGGAT AGCATTACCG TGGTGATTAC CAAAGTGACC 360 GATAGCTATC CGGAACCGAC CCAGCTGCTG ATGGGCACCA AAAGCGTGTG CGAAGTGGGC 420 AGCAACTGGT TTCAGCCGAT TTATCTGGGC GCGATGTTTA GCCTGCAGGA AGGCGATAAA 480 CTGATGGTGA ACGTGAGCGA TATTAGCCTG GTGGATTATA CCAAAGAAGA TAAAACCTTT 540 TTTGGCGCGT TTCTGCTGTA ACTCGAG 567 。
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- 本发明公开了一种增加植物来源糖基转移酶基因可溶性异源表达的方法，将标签蛋白基因与目标蛋白基因构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中构建得到重组菌，重组菌诱导表达，标签蛋白与目标蛋白进行融合表达，从而提高糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达；所述标签蛋白基因为3’‑磷酸腺苷‑5’磷酸酶基因、2‑氧代‑3‑脱氧‑6磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因或者抗终止作用因子基因中的至少一种，将标签蛋白基因构建在表达载体的Nde I和Hind III之间，将目标蛋白构建在Hind III和EcoR I之间，且标签蛋白和目标蛋白的之间添加一组肠激酶酶切位点，蛋白序列为DDDDK。融合表达与之前目标蛋白单独表达相比，蛋白的可溶性增加一倍，且酶活提高了80%。
- 靶向VEGFR-2和/或VEGFR-3嵌合抗原受体及其应用-201910302677.3
- 王建祥;王敏;邢海燕;饶青;徐颖茜;唐克晶;田征 - 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所）
- 2019-04-16 - 2019-07-12 - C12N15/62
- 本发明公开了一种靶向VEGFR‑2和/或VEGFR‑3嵌合抗原受体及其应用。所述嵌合抗原受体包含胞外区、跨膜区和胞内信号转导区，其编码的所述胞外区包含结合VEGFR‑2和/或VEGFR‑3的结合结构域，所述结合VEGFR‑2和/或VEGFR‑3的结合结构域为VEGFR‑2和/或VEGFR‑3的配体或与所述VEGFR‑2和/或VEGFR‑3的配体具有90‑99％同一性的氨基酸序列。实验证明该嵌合抗原受体修饰的T细胞对表达VEGFR‑2/3的肿瘤细胞以及脐静脉内皮细胞有很强的杀伤作用，同时能够破坏HUVEC的成管功能，可用于VEGFR‑2/3阳性的乳腺癌等肿瘤的治疗。
- 一种双基因重组复合物巨噬细胞疫苗及其制备方法和应用-201910034389.4
- 赵旺 - 重庆医科大学附属永川医院
- 2019-01-15 - 2019-06-28 - C12N15/62
- 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种双基因重组复合物、其制备的疫苗及其制备方法和应用。所述重组复合物由多肽复合物和双基因表达盒组成，所述双基因表达盒上游至下游依次由GFAP启动子、IRAK2 RNAi基因、终止子、内部核糖体进入位点IRES、SMURF1基因和终止子组成；所述多肽复合物由穿膜肽和正电荷多肽连接构成。本发明提供的所述双基因重组复合物巨噬细胞疫苗可体外转染脑出血的血肿周围组织，能够抑制巨噬细胞的活化，有效抑制脑出血的炎症反应和脑水肿，并提高神经功能评分，为脑出血的治理提供理想的策略且制备方法简单，成本低，在脑出血的治疗领域具有良好的开发应用前景。
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