本发明提供一种GD2嵌合抗原受体修饰的T细胞及其应用，所述GD2嵌合抗原受体包括单链抗体scFv‑GD2，所述单链抗体scFv‑GD2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示。本发明对单链抗体scFv‑GD2的核苷酸序列进行了优化，制备得到CAR‑GD2修饰的T细胞，与靶细胞共培养后，IFN‑γ的释放量明显增多；对LAN‑1细胞的杀伤率也明显提高，体内实验中对小鼠神经母细胞瘤的生长具有明显的抑制作用；本发明制备的CAR‑GD2‑T细胞和LAN‑1细胞按照效靶比为10:1共培养24h后，IFN‑γ释放量为9681 pg/mL。
本发明提供一种抗PD‑1双靶点的CAR‑NK细胞及其应用，采用PD‑1和CTLA‑4为双靶点的嵌合抗原受体修饰NK细胞，得到CAR‑NK细胞；所述嵌合抗原受体包括以下模块：Leader、PD‑1单链抗体、Linker、CTLA‑4单链抗体、CD8α铰链区、NKG2D跨膜区、2B4共刺激区、CD3ζ信号传导区、T2A自剪切区、RQR8分子开关区；所述PD‑1单链抗体的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；所述CTLA‑4单链抗体的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.5所示。本发明制备的CAR‑NK细胞，提高CAR‑NK细胞对肿瘤靶细胞的杀伤率，提高对小鼠肿瘤的抑制效率。
