本发明涉及病毒检测技术领域,且公开了一种PPV检测的crRNA引物对、CRISPRCas12a系统及应用方法,包括以下步骤:S1、组织样品的处理:将称取约1g的各组织样品,加入1mL PBS后放入研磨钵中研磨成匀浆,转移至无菌离心管中,在离心机中以12000rpm/min离心3min;S2、病毒核酸的提取:使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒对病毒进行核酸提取;S3、引物设计:在GenBank中检索猪细小病毒全基因组(GenBank ID:NC_001718.1),通过Meglign软件分析比对,确定猪细小病毒全基因组中高度保守片段为VP2基因,使用Primer Premier 5软件,设计VP2基因的全长引物,根据猪细小病毒全基因组中高度保守片段VP2基因,使用CRISPR‑DT网站中Cpf1引物设计软件设计猪细小病毒VP2基因的crRNA引物,并委托某生物公司合成生产。
本发明公开了一种干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的siRNA,具有Seq ID No.1和Seq ID No.2所示的正义链和反义链序列,以及构建了干扰羊驼黑色素细胞CDK5基因表达的pENTR/U6 shRNA表达质粒。本发明所述pENTR/U6 shRNA表达质粒在黑色素细胞系中的生物性效应体现为对羊驼黑色素细胞系TYR和MC1R的调节作用,以及对小鼠毛色表型变化的影响。