本发明提供了一种Cas12a变体及其在基因编辑中的应用,所述Cas12a变体为LbCas12a‑K538R,氨基酸序列如SED ID NO.2所示。本发明首次通过蛋白改造,获得Cas12a变体,使Cas12a的PAM识别相比较对应野生型更严格,从而降低脱靶效应;所述三种Cas12a变体能够在crRNA的介导下定点对真核生物基因组进行基因编辑且具有更低的脱靶效应,三种Cas12a变体的发现进一步扩大了基因编辑工具的种类。
本发明公开了基于CRISPR/Cas12a方法检测志贺氏菌的试剂盒及其使用方法,本发明所述的试剂盒包括CRISPR/Cas12a引物、crRNA或crRNA制备试剂、核酸扩增试剂、探针和Cas12a酶;所述CRISPR/Cas12a引物包括如SEQ ID NO.1所示序列的CRISPR/Cas12a上游引物,如SEQ ID NO.2所示序列的CRISPR/Cas12a下游引物。
本发明提供了一种Cas12a变体及其在基因编辑中的应用,所述Cas12a变体包括如下中的至少一种:Lb2Cas12a‑K518R,氨基酸序列分别如SED ID NO.1所示;LbCas12a‑K538R,氨基酸序列分别如SED ID NO.2所示;AsCas12a‑K548R,氨基酸序列分别如SED ID NO.3所示。本发明首次通过蛋白改造,获得Cas12a变体,使Cas12a的PAM识别相比较对应野生型更严格,从而降低脱靶效应;所述三种Cas12a变体能够在crRNA的介导下定点对真核生物基因组进行基因编辑且具有更低的脱靶效应,三种Cas12a变体的发现进一步扩大了基因编辑工具的种类。