本发明提出了BsER烯还原酶及其突变体的构建及应用，属于生物技术领域；BsER烯还原酶来源于枯草芽孢杆菌，氨基酸序列为SEQ ID NO.1；以BsRE烯还原酶及其突变体作为催化剂，加入辅因子，形成的反应体系，可得到光学纯的(R)‑1a和(R)‑1b及产物cis‑2a和cis‑2b；可将(S)‑1a和(S)‑1b还原为(3aR,7aS)‑2a、(4aR,8aS)‑2b；烯还原酶突变体可将HP酮衍生物还原为(1S,3aR,7aS)‑4a，还可将(1S,8aS)‑3b还原为(1S,4aR,8aS)‑4b。烯还原酶及其突变体为HP酮、WM酮及其衍生物的特异性还原提供了的高效的生物催化剂。
本发明属于植物基因工程领域，公开了枳抗寒基因PtrP5CS1及其在植物抗寒遗传改良中的应用，PtrP5CS1基因为一种从极抗寒柑橘材料枳中分离、克隆出的一个合成酶基因，其序列为SEQ ID NO.1所示。将该基因构建超表达和干涉载体，并通过农杆菌介导的遗传转化将其导入枳中，获得的转基因植株经生物学功能验证，表明本发明所克隆的PtrP5CS1基因具有提高植物抗寒性的功能。该基因的发现，为植物抗逆分子设计育种提供新的基因资源，为实施绿色农业、节水农业提供新的遗传资源，该遗传资源的开发利用有利于降低农业生产成本和实现环境友好。
本发明涉及一种黄酮合酶I/黄烷酮‑3‑羟化酶及在黄酮类化合物合成领域的应用。本发明公开了一种松叶蕨黄酮合酶I/黄烷酮‑3‑羟化酶，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明首次从蕨类植物中克隆鉴定的一个可以在黄烷酮C2和C3位之间引入双键或C3位引入羟基的双功能酶。其对常见的黄烷酮化合物有较高的催化活性，为生产黄酮类化合物提供了一个候选基因。PnFNS I/F3H可以在大肠杆菌体内可合成黄酮和二氢黄酮醇，在转基因拟南芥中同时提高植物黄酮和黄酮醇类化合物含量。该基因可用于在大肠杆菌和植物底盘中生产黄酮和黄酮醇类化合物，具有较高的应用价值。
本发明涉及一种酶活高、稳定性好的重组人Cu、Zn‑SOD及其制备方法和用途，其编码基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，本发明提供的重组人Cu、Zn‑SOD的酶活比天然人Cu、Zn‑SOD的酶活高约一倍，酶活稳定性相对于天然人Cu、Zn‑SOD的稳定性高。
本发明涉及微生物领域，公开了自洽型P450酶及其制备方法、25‑羟基胆固醇或其衍生物的制备方法。该自洽型P450酶为具有如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的酶；或者为前述氨基酸序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸残基且仍具有自洽型P450酶活性的氨基酸序列的酶；或者为与前述氨基酸序列具有80％以上同源性且具有自洽型P450酶活性的氨基酸序列所示的酶；或者为前述氨基酸序列的氨基末端和/或羧基末端连接有标签的氨基酸序列的酶；或者为前述氨基酸序列的氨基末端连接有信号序列的氨基酸序列的酶。该自洽型P450酶具有显著提高的转化胆固醇或其衍生物的能力。
本发明公开了一种来源于香菇的真菌漆酶基因、真菌漆酶及其在降解四环素类抗生素中的应用。所述真菌漆酶LeLAC12的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因真菌漆酶基因LeLAC12的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述真菌漆酶LeLAC12耐酸，最适pH为3.0，在pH＝2.0～6.0范围内具有较好的稳定性；最适温度为30℃，能够耐受高温，在70℃条件下处理12h仍能保持37％的酶活。所述真菌漆酶LeLAC12可用于酸性、高温等条件下四环素类抗生素污染物的去除，将环境中的四环素类抗生素降低到安全水平，减少抗生素抗药基因的产生和传播，具有较高的应用价值。
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种高效羟化4‑雄烯‑3‑酮系列化合物9α位的羟化酶及其应用，所述羟化酶氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述羟化酶能够生产9α‑羟基‑4‑雄烯‑3‑酮类化合物。本发明的C9α羟化酶KshA底物识别宽泛，高产9α‑羟基‑4‑雄烯‑3‑酮类化合物，纯化过程不受还原组分KshB共表达的限制，可用于体外产生9α‑羟基‑4‑雄烯‑3‑酮类化合物，本发明还提供了一株生产9α‑羟基‑4‑雄烯‑3，17‑二酮的工程菌，其可转化20g/L植物甾醇产生9.8g/L的9α‑羟基‑4‑雄烯‑3，17‑二酮。
