本发明涉及微生物领域，公开了自洽型P450酶及其制备方法、25‑羟基胆固醇或其衍生物的制备方法。该自洽型P450酶为具有如SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的酶；或者为前述氨基酸序列经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸残基且仍具有自洽型P450酶活性的氨基酸序列的酶；或者为与前述氨基酸序列具有80％以上同源性且具有自洽型P450酶活性的氨基酸序列所示的酶；或者为前述氨基酸序列的氨基末端和/或羧基末端连接有标签的氨基酸序列的酶；或者为前述氨基酸序列的氨基末端连接有信号序列的氨基酸序列的酶。该自洽型P450酶具有显著提高的转化胆固醇或其衍生物的能力。
本发明公开了一种基因工程菌，所述基因工程菌为在细胞中表达CYP基因、铁氧还原蛋白基因、铁氧还原蛋白还原酶基因和脱氢酶基因而构建的工程菌；其中，所述CYP基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.11所示。本发明还公开了该基因工程菌在制备骨化二醇和/或骨化三醇中的应用。将本发明的工程菌应用于骨化二醇与骨化三醇的合成时，产量均显著提高，将其应用于工业化生产时成本更低，且反应特异性高、反应条件温和、环境友好，满足了骨化二醇与骨化三醇的工业化生产需求。
本发明提供了一种固定化转氨酶在制备西他列汀和/或(R)‑3‑氨基‑1‑吗啉‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1‑丁酮中的用途；所述固定化转氨酶包括树脂和转氨酶突变体，所述转氨酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.7所示。本发明还提供了一种固定化转氨酶、一种转氨酶突变体及其制备方法和用途。本发明的转氨酶突变体催化酮酰胺底物时酶活很高，将其制备成固定化转氨酶后酶活依旧很高，将其用于催化酮酰胺底物以生产西他列汀或其中间体时结合筛选好的溶剂反应体系，固定化转氨酶的转化率高且立体选择性好、稳定性好、可重复使用率提高、操作更简单，进而降低了生产成本，有利于工业化生产。
