制备W‑Cas9的方法包括以下步骤:1)制备TALEN双质粒,其中左边TALEN识别序列为序列表中SEQ ID NO:1,右边TALEN识别序列为序列表中SEQ ID NO:2,体外转录获得TALENs mRNA;2)构建配体质粒,其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件:TALENs靶点、左同源臂、Cas9基因表达盒、右同源臂和TALENs靶点;3)共转家蚕新鲜卵得G0代,G0代自交得G1代,本发明利用TALENs和CRISPR/Cas9技术在家蚕中定点靶向胚胎发育必须基因,致使胚胎发育期所有雌性均致死,从而建立家蚕雄性专养品系,可以大幅提高家蚕生丝品质。
本发明提供人源肝细胞中Nrf1α基因定向敲除识别序列对、Talens、载体对及应用,所述识别序列对由左臂识别序列和右臂识别序列组成,左臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,右臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述核酸酶Talens由识别SEQ ID NO.1核苷酸序列的核酸酶左臂Nrf1α‑Talen L和识别SEQ ID NO.2核苷酸序列的核酸酶右臂Nrf1α‑Talen R
本发明提供人源肝细胞中Nrf1β基因定向敲除识别序列对、Talens、载体对及应用,所述识别序列对由左臂识别序列和右臂识别序列组成,左臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,右臂识别序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述核酸酶Talens由识别SEQ ID NO.1核苷酸序列的核酸酶左臂Nrf1β‑Talen L和识别SEQ ID NO.2核苷酸序列的核酸酶右臂Nrf1β‑Talen R