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[发明专利]限制性核酸内切酶-CN95108991.9无效
发明人：野村佳子;石野良纯;加藤郁之进 -专利权人：宝酒造株式会社
申请日： 1995-07-27 - 公布日： 2001-03-07 - 主分类号： C12N9/14 文献下载
摘要：一种限制性核酸内切酶，其可以识别双链ＤＮＡ下列化学结构式１的核苷酸序列，并在箭头所示位点上严格裂解上述核苷酸序列。核酸内切酶可通过培养能产生它的链霉菌属的菌株（ＦＥＲＭＢＰ－５０２２）来制备。
限制性核酸内切酶

[发明专利]生产Af1II限制性核酸内切酶和甲基代酶的方法-CN88107078.5无效
发明人：基思;洛恩 -专利权人：新英格兰贝艾拉伯斯公司
申请日： 1988-10-14 - 公布日： 1989-08-02 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：本发明涉及克隆和生产Af1II限制性核酸内切酶的方法，其包括1)向宿主内引入由水花鱼腥藻(Anabaenaflos-aquae)得到的限制性核酸内切酶基因以便该限制基因得以表达；2)培养含编码并表达Af1II限制性核酸内切酶活性之质粒的宿主；以及3)由发酵培养的、含编码和表达Af1II限制性核酸内切酶活性之质粒的宿主中纯化得到Af1II限制性核酸内切酶。
生产 af1ii 限制性核酸内切酶甲基方法

[发明专利]一种利用核苷酸衍生物调节限制性核酸内切酶的酶切活性的方法-CN201310305768.5有效
发明人：关一夫;赵国杰 -专利权人：关一夫;赵国杰
申请日： 2013-07-19 - 公布日： 2013-12-11 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用核苷酸衍生物修饰DNA双链底物来调节限制性核酸内切酶对底物的酶切活性的方法。该方法包括利用一种或几种核苷酸衍生物修饰限制性核酸内切酶的底物，即脱氧核酸双链，的识别序列中一个或几个核苷酸以及邻近识别序列3'-末端和5'-末端的核苷酸，从而在不改变限制性核酸内切酶识别序列的前提下调节限制性核酸内切酶对该底物的酶切活性使用核苷酸衍生物对限制性核苷酸内切酶识别序列或其附近的核苷酸进行选择性的修饰，从而达到调节限制性核酸内切酶的特异性酶切效率的方法。该方法可以应用在限制性核酸内切酶参与的各种生物检测和生物化学反应中。
一种利用核苷酸衍生物调节限制性核酸内切酶活性方法

[发明专利]基于滚环扩增的限制性核酸内切酶单链切割的分析方法-CN201410117436.9有效
发明人：关一夫;赵国杰 -专利权人：关一夫;赵国杰
申请日： 2014-03-26 - 公布日： 2014-10-08 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于滚环扩增的限制性核酸内切酶单链切割的分析方法。该方法中，限制性核酸内切酶的底物是含有酶切位点的DNA双链，其中一条是待检测环形单链模板，另一条是线性单链寡核苷酸。加入限制性核酸内切酶后，切割底物，环形单链模板不断减少，滚环扩增所产生的荧光信号也随之减少。通过检测荧光信号的变化分析限制性核酸内切酶对环形单链模板的切割效率。该方法为研究限制性核酸内切酶对特定单链的切割提供了快速、简便、定量的测量技术。此外，该技术还可以用来研究限制性核酸内切酶与核酸的相互作用及酶切机制、切刻酶的单链切割作用、核苷酸衍生物修饰对限制性核酸内切酶切割的影响，具有重要的科学价值和广阔的应用前景。
基于扩增限制性核酸内切酶单链切割分析方法

[发明专利]一种HindIII限制性核酸内切酶的制备方法-CN201811651453.5在审
发明人：徐志豪;郑实;崔利兰 -专利权人：吴江近岸蛋白质科技有限公司
申请日： 2018-12-31 - 公布日： 2019-06-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种HindIII限制性核酸内切酶的制备方法，该方法构建HindIII限制性核酸内切酶的原核表达载体，转入工程菌中，经培养后，获得表达菌株，然后进行表达和纯化。本发明开发了HindIII限制性核酸内切酶的制备方法。本发明通过构建HindIII限制性核酸内切酶的原核表达载体，转入工程菌中，经培养后，获得表达菌株，然后进行表达纯化获得HindIII限制性核酸内切酶。使用本方法制备出的HindIII限制酶，其生理活性高且稳定。
限制性核酸内切酶制备原核表达载体表达菌株工程菌构建转入重组蛋白表达表达和纯化生理活性制备周期常规的限制酶开发

[发明专利]一种非限制性核酸内切酶突变体及其制备方法-CN202211550436.9在审
发明人：杨洋;汪寄宇 -专利权人：上海拜朗生物科技有限公司
申请日： 2022-12-05 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种非限制性核酸内切酶突变体及其制备方法。本发明的一种非限制性核酸内切酶突变体，在野生型非限制性核酸内切酶氨酸酸序列上进行六个氨基酸位点的突变获得，六个氨基酸突变位点为：R65V、N66A、W67F、E135G、D136T、Q137I，所述的非限制性核酸内切酶突变体的氨基酸序列如本发明通过突变关键位点的氨基酸带电荷或疏水性的改变，从而改变核酸内切酶的空间结构，提高非限制性核酸内切酶的表达效率和活性。
一种限制性核酸内切酶突变体及其制备方法

[发明专利]一种LAMP防污染的方法-CN201710530484.4在审
发明人：马翠萍;王富鑫;石超;井豪;韩灵芝;张美玲 -专利权人：青岛科技大学
申请日： 2017-06-30 - 公布日： 2019-01-15 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种LAMP防污染的方法，具体包括如下步骤：(1)设计LAMP的两条内引物含有限制性核酸内切酶的识别序列；(2)将步骤(1)中的内引物与LAMP的外引物及扩增靶标杂交，并加入聚合酶和限制性核酸内切酶，将混合物孵育一段时间，消除反应管中的污染物；(3)将混合物在高温条件下孵育一段时间，灭活反应管中的限制性核酸内切酶；(4)将混合物置于适宜温度进行反应，最终得到大量的扩增产物。利用限制性核酸内切酶对DNA双链切割的特点，将因污染而进入LAMP反应管中的含有限制性核酸内切酶的识别序列的上一次LAMP产物进行切割，使引物不能与污染产物进行结合，从而避免污染。
限制性核酸内切酶混合物防污染内引物切割混合物孵育避免污染高温条件扩增产物污染产物消除反应反应管聚合酶外引物靶标孵育扩增灭活引物污染物杂交污染

[发明专利]酶切反应后快速去除限制性核酸内切酶的方法-CN202211647796.0在审
发明人：肖晓文;曹文刚;崔银芳;喻春函 -专利权人：湖北擎科生物科技有限公司
申请日： 2022-12-21 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明涉及酶切反应后快速去除限制性核酸内切酶的方法，该方法包括：制备偶联有限制性内切酶的磁珠；将偶联有限制性内切酶的磁珠与底物DNA反应完成后，通过磁吸可快速去除内切酶。本申请方法不需要后续失活或者柱提取的步骤，回收的限制性内切酶仍具有较好的活性，可反复使用；且通过将酶切反应置于96孔板中并结合自动提取仪，可实现高通量去除内切酶。
反应快速去除限制性核酸内切酶方法

[发明专利]一种拟南芥基因突变体的鉴定方法-CN201810700980.4在审
发明人：舒凯;罗晓峰;代宇佳;陈锋;周文冠;尹晗;赵思华;帅海威;孟永杰;杨文钰 -专利权人：四川农业大学
申请日： 2018-06-29 - 公布日： 2018-11-13 - 主分类号： C12Q1/6858 文献下载
摘要：本发明公开了一种拟南芥基因突变体的鉴定方法，包括以下步骤：通过dCAPs Finder 2.0网站，设计含有限制性核酸内切酶酶切位点的引物；然后进行引物合成和PCR扩增，扩增出含有限制性核酸内切酶酶切位点的核酸片段；通过限制性核酸内切酶酶切，切出野生型、突变体两者大小不同的片段；通过核酸凝胶电泳，在琼脂糖凝胶中区分条带大小；利用核酸电泳成像系统分析样品基因为正常、突变或杂合情况。
限制性核酸内切酶突变体拟南芥基因酶切位点琼脂糖凝胶成像系统分析样品核酸电泳核酸片段可重复性凝胶电泳样品鉴定引物合成野生型核酸扩增酶切切出条带网站引物杂合突变耗时

[发明专利]一种含耐热限制性内切酶的聚合酶链式反应方法和试剂盒-CN200510025631.X无效
发明人：徐定邦;谢文凯;府雷宇 -专利权人：徐定邦;徐文慧
申请日： 2005-04-30 - 公布日： 2006-11-08 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：一种含耐热限制性核酸内切酶的聚合酶链式反应方法和相应的试剂盒。选择引物对的位置使扩增产物不含有所述的耐热限制性核酸内切酶识别顺序，或根据既定的扩增产物的限制性内切酶图谱选择含不同内切酶组合的试剂盒。根据所用限制性核酸内切酶的耐热程度选择引物，使扩增产物的Tm比内切酶的最高耐热温度稍低并控制循环变性温度与之相适应。发明可用于反转录聚合酶链式反应降低非专一产物或消除基因组DNA对扩增的干扰，也可用于崁套式PCR在后期阻断外套引物的扩增。
一种耐热限制性内切酶聚合链式反应方法试剂盒

[发明专利]一种建库方法及SNP分型方法-CN201610772852.1在审
发明人：盛司潼;黄思强 -专利权人：广州康昕瑞基因健康科技有限公司
申请日： 2016-08-30 - 公布日： 2018-07-20 - 主分类号： C12Q1/6869 文献下载
摘要：本发明提供了一种建库方法，包括：PCR扩增待测序样本，得到扩增产物；在扩增产物上连接接头一，得到含有IIS型限制性内切酶识别序列以及IIS型限制性内切酶切割位点的连接产物，接头一为双链核酸分子，IIS型限制性内切酶切割位点与待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；采用IIS型限制性内切酶对连接产物进行酶切，得到含有待测SNP位点和接头一的第一核酸片段，第一核酸片段上经酶切形成第一末端；在第一核酸片段的第一末端处连接接头二，得到文库分子，接头二为含有测序引物结合位点的双链核酸分子。本发明缩短了位点检测时间，提高了检测准确性，且统一了同一体系中进行多个位点检测的测序引物。
核酸片段双链核酸分子测序引物扩增产物连接产物连接接头切割位点建库酶切结合位点同一体系位点检测文库分子点检测末端处试剂盒个位检测测序碱基上经突变样本统一

[发明专利]基因或核酸序列的酶切－连接长序列半合成方法-CN200710038807.4无效
发明人：赫英俊;肖爱军;周磊;邵永胜 -专利权人：上海捷瑞生物工程有限公司
申请日： 2007-03-30 - 公布日： 2008-10-01 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及基因或核酸序列的酶切－连接长序列半合成方法，是通过以下步骤实现的，目标基因或核酸序列分析：对要求合成或获得的目标序列进行分析，设计分段化学合成的片段长度、分割位点；目标基因或核酸序列的片段化学合成：根据上述分析的结果，用化学合成法合成目标基因或脱氧核糖核酸序列的片段，在合成时人为引入适当的限制性内切酶识别位点；目标基因或核酸序列各片段的限制性酶切反应：用能够识别上述位点的限制性内切酶进行酶切反应，产生含有粘性末端的片段；目标基因或核酸序列各片段的正确连接：用适当连接酶对分段合成的基因或核酸序列的片段进行常规的酶促连接反应；可获得10000个碱基对，最长达到13000碱基对；并且错误率低、成本也低
基因核酸序列连接合成方法

[发明专利]一种建库方法及SNP分型方法-CN201610773096.4有效
发明人：盛司潼;黄思强 -专利权人：武汉康昕瑞基因健康科技有限公司
申请日： 2016-08-30 - 公布日： 2021-11-09 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本发明提供了一种建库方法，包括：A、利用特异性扩增引物组对含待测SNP位点的待测序样本进行PCR扩增，得到扩增产物；所述引物组中的至少一种引物上含有IIS型限制性内切酶识别序列，所述扩增产物上含有IIS型限制性内切酶切割位点，所述IIS型限制性内切酶切割位点与所述待测SNP位点之间的距离为0至5个碱基；B、采用IIS型限制性内切酶对扩增产物进行酶切，得到含有待测SNP位点的第一核酸片段，且所述第一核酸片段上经酶切形成第一末端；C、在连接酶作用下，所述第一核酸片段在第一末端处连接测序接头，得到文库分子。本发明缩短了位点检测时间，提高了检测的准确性，且统一了同一体系中进行多个位点检测的测序引物。
一种方法 snp

[发明专利]一种适用于无细胞合成限制性内切酶BsaI的线性DNA模板、体系及其用途-CN202210262366.0在审
发明人：李健;刘晚秋;季向阳;卢屹聪 -专利权人：上海科技大学
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种适用于无细胞合成限制性内切酶BsaI的线性DNA模板、体系及其用途。一种适于无细胞合成限制性内切酶BsaI的线性DNA模板，所述线性DNA模板依次包括含有启动子的片段、限制性内切酶BsaI的编码基因和含有终止子的片段，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述线性DNA模板不含有限制性内切酶BsaI的酶切位点。本发明的线性DNA模板，能有效防止线性DNA模板被核酸酶降解，其能够适用于任意的体外无细胞蛋白体系且能顺利表达，采用本发明的线性DNA模板进行体外无细胞蛋白合成，获得的限制性内切酶BsaI的纯度高、比活高
一种适用于细胞合成限制性内切酶 bsai 线性 dna 模板体系及其用途

[发明专利]扩增特异核酸序列的方法-CN96194151.0无效
发明人：艾利森·韦利安·托德 -专利权人：强生研究有限公司
申请日： 1996-04-12 - 公布日： 1998-06-17 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供了检测个体中遗传多态性的方法。在一种形式上该方法包括下面的步骤(1)获取含有个体核酸的样品;(2)通过包括热循环和引物的方法扩增步骤(1)的核酸样品,扩增在耐热限制性核酸内切酶存在下进行,该酶在热循环过程中保持活性,挑选引物以使它们向扩增自不包括多态性的核酸或扩增自包括多态性的核酸中导入由耐热限制性核酸内切酶所识别的序列;和(3)分析步骤(2)的产物以检测多态性的存在与否。
扩增特异核酸序列方法

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