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[发明专利]胰岛细胞及其分离方法-CN202210489918.1在审
发明人：李晓牧;王宝敏;杨玉梅 -专利权人：复旦大学附属中山医院
申请日： 2022-05-07 - 公布日： 2022-06-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种胰岛细胞及其分离方法，该分离方法包括：将离体的胰腺组织放入磷酸缓冲盐溶液中，将胶原酶溶液多部位灌注处理过的胰腺组织内，使其充分膨胀，得到肿胀的胰腺组织；将肿胀的胰腺组织放入含胶原酶溶液中，离心，消化数次，加入缓冲液终止消化，离心，弃上清，重悬，得到重悬液；过滤，滤液经过数次重悬，得到糜状消化终产物，过滤，得到沉淀物，吹至培养皿中，收集即可；本发明在进行胶原酶胰腺灌注时，采用多部位缓慢注射，从而能充分充盈胰腺组织，减少操作时间
胰岛细胞及其分离方法

[发明专利]一种水溶性β－1,3/1,6－葡聚糖的制备方法-CN200710121855.X有效
发明人：呙于明;张博 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2007-09-17 - 公布日： 2008-02-06 - 主分类号： C08B37/02 文献下载
摘要：该方法，包括下述步骤：1)氧化处理：将水不溶性β－1，3/1，6－葡聚糖悬浮于氧化剂溶液中，在2～8℃，于暗处静置氧化反应16～24h，离心收集沉淀；2)洗涤：将步骤1)中所得的沉淀用乙醇和丙酮分别重悬搅拌洗涤30分钟～1小时，离心收集沉淀；3)超声处理：将步骤2)所得沉淀重悬于体积百分浓度为0.05～0.2％的DMSO溶液中，将重悬液进行超声处理20分钟；离心收集上清液得到水溶性β－1，3/1，6－葡聚糖溶液
一种水溶性聚糖制备方法

[发明专利]一种提高尼罗罗非鱼耐盐性能的嗜盐芽孢杆菌及其应用-CN201911015245.0在审
发明人：汤上上;刘树彬;王世锋;李二超 -专利权人：海南大学
申请日： 2019-10-24 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：在无菌条件下，将嗜盐性芽孢杆菌普通海水液体培养基进行活化；将活化后的菌液进行扩大培养，培养好的培养液即为接种液。用已灭菌的磷酸缓冲液清洗两次后，重悬，制成细胞悬液，均匀的喷洒在罗非鱼基础饲料上，使其浓度达到10
罗非鱼芽孢杆菌基础饲料嗜盐性活化培养液罗非鱼配合饲料消化吸收能力抗氧化能力磷酸缓冲液液体培养基抗菌能力扩大培养无菌条件细胞悬液盐度接种液灭菌菌液耐盐重悬喷洒清洗海水饲料应用

[发明专利]一种快速获得和纯化人脐带间充质干细胞的方法-CN201610615998.5在审
发明人：周佳;厉民;王峥 -专利权人：浙江省人民医院
申请日： 2016-07-28 - 公布日： 2016-12-14 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及快速获得和纯化人脐带间充质干细胞的方法，包括如下步骤：1)在无菌条件下，收集人类新生儿脐带组织，用无菌PBS液冲洗，去除血污，将脐带中的血管组织通过机械分离法去除，得到华通氏胶块；2)将步骤1)中获得的华通氏胶块用无菌剪制成小块，并用细胞培养液重悬后，接种于培养皿中，然后在培养箱中孵育，得到贴壁细胞；3)将步骤2)培养皿中的培养液及悬浮细胞弃去，用复合胶原酶差速消化，将贴壁细胞消化下来，加入PBS清洗、重悬后得到细胞悬液：P1代hUMSCs。
一种快速获得纯化脐带间充质干细胞方法

[发明专利]一种CAR‑T细胞制剂及低温保存介质-CN201610765515.X在审
发明人：荆东辉 -专利权人：灏灵赛奥（天津）生物科技有限公司
申请日： 2016-08-29 - 公布日： 2018-03-09 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：一种CAR‑T细胞制剂方法，包括以下步骤(1)将培养的CAR‑T细胞混匀后，转移至离心管中，离心，弃掉上清液；(2)将离心后的细胞团先用DPBS重悬，加DPBS，在磁力架上静止，实现细胞跟磁珠的分离；(3)用移液管将细胞悬液转移至新的离心管中，重复去磁珠操作两次；(4)在200‑500g条件下，离心，弃掉上清液，备用；(5)根据回输的细胞数量，用低温保存介质重悬细胞。
一种 car 细胞制剂低温保存介质

[发明专利]小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法-CN202010090044.3在审
发明人：曾瑾;王玉炯;史客松;马臣杰 -专利权人：宁夏大学
申请日： 2020-02-13 - 公布日： 2020-05-22 - 主分类号： C12N5/0786 文献下载
摘要：本发明提供了一种小鼠骨髓巨噬细胞的制备方法，包括：(1)配制完全培养基(2)颈椎脱位6–9周的小鼠；(3)取小鼠股骨及胫骨，吹出小鼠骨髓细胞，重复多次，直至骨无色，吹散后收集单细胞悬液，离心，弃去上清；(4)在细胞沉淀中加入红细胞裂解液处理；(5)迅速加入完全培养基中和，离心，弃去上清；(6)加入完全培养基到离心细胞沉淀中，使之重悬；(7)将重悬细胞接种至细菌培养皿中培养；(8)4小时后，将悬浮细胞吸出，重新接种在含诱导剂的完全培养基的细胞培养皿中，此为第1天；(9)在第3天的时候，对细胞进行半量换液，此后隔天换液至第7天，进行检测。
小鼠骨髓巨噬细胞制备方法

[发明专利]一种酶催化剂及其制备方法与在生产3-氨基丙酸中的应用-CN202010116019.8在审
发明人：陈可泉;冯娇;王昕 -专利权人：南京凯诺生物科技有限公司
申请日： 2020-02-25 - 公布日： 2020-06-19 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种酶催化剂及其制备方法与在生产3‑氨基丙酸中的应用，所述的制备方法包括如下步骤：(1)将L‑天冬氨酸脱羧酶菌株培养，离心，得到菌体；(2)用水将步骤(1)得到的菌体重悬，得到重悬液；向重悬液中加入表面活性剂，搅拌，离心，得到上清液；(3)向步骤(2)得到的上清液中加入金属离子，混合，再加入配体溶液，搅拌，洗涤，离心，所得沉淀物即为酶催化剂。
一种催化剂及其制备方法生产氨基丙酸中的应用

[发明专利]一种PBMC的CFSE染色方法及其应用-CN202110086248.4在审
发明人：朱灏 -专利权人：华夏源细胞工程集团股份有限公司
申请日： 2021-01-22 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种PBMC的CFSE染色方法所述方法包括以下步骤：S1，冻存PBMC的复苏：将PBMC冻存管融化、离心，弃去上清液，加入培养液重悬PBMC并计数；S2，PBMC的CFSE染色：调整PBMC的细胞浓度，量取一定体积的细胞悬液，加入CFSE染色液，染色5‑10min，再加入预冷的染色终止液，离心、弃去上清液、加入的完全培养基重悬。
一种 pbmc cfse 染色方法及其应用

[发明专利]一种阿托伐他汀钙干混悬剂及其制备方法-CN200810126259.5有效
发明人：陈宝林;雍智全;阴元魁;陈皓;赖观平;韩为跃;闻业磊 -专利权人：东莞太力生物工程有限公司
申请日： 2008-07-28 - 公布日： 2010-02-03 - 主分类号： A61K9/14 文献下载
摘要：本发明涉及一种阿托伐他汀钙干混悬剂及其制备方法。本发明的阿托伐他汀钙干混悬剂包含：1重量份-10重量份的阿托伐他汀钙、10重量份-95重量份的填充剂、1重量份-30重量份的混悬剂和/或助悬剂、2重量份-40重量份的矫味剂以及0.2重量份-2.0重量份的润滑剂本发明的阿托伐他汀钙干混悬剂具有分散度高、分布均匀，吸收快，生物利用度高，顺应性好，口感好，以及稳定等优点。本发明的阿托伐他汀钙干混悬剂可用于调节血脂。
一种阿托伐汀钙干混悬剂及其制备方法

[发明专利]一种适用于小鼠肝脏单细胞测序的低温解离方法-CN202211209695.5在审
发明人：蒋建国;陈志锋;梁洪 -专利权人：杭州联川生物技术股份有限公司
申请日： 2022-09-30 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：包括收获新鲜的肝脏组织进行处理；后放入到加有地衣芽孢杆菌蛋白酶混合物的培养皿中解离；并在2‑6℃环境下孵育，得到组织匀浆；将组织匀浆过细胞筛，用DMEM或1640培养基冲洗过滤器并停止酶活性，得到细胞悬液；将细胞悬液进行离心，去上清液；并用含胎牛血清的DMEM或1640培养基重悬细胞，然后过细胞筛；收集细胞沉淀，使用DPBS重悬细胞，即可得到解离后的肝脏单细胞。
一种适用于小鼠肝脏单细胞低温解离方法

[发明专利]一种单细胞内原位qPCR方法-CN202010900980.6在审
发明人：尹东;张静源;张寅 -专利权人：中山大学孙逸仙纪念医院
申请日： 2020-08-31 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： C12Q1/6851 文献下载
摘要：本发明的方法包括如下步骤：(1)将细胞消化，吹打成为单细胞悬液，去上清，将细胞沉淀重悬，加入甲醛溶液进行固定，之后加入Triton溶液进行打孔，去上清，将细胞沉淀重悬；(2)采用分子信标探针进行探针法RT‑qPCR
一种细胞内原位 qpcr 方法

[发明专利]一种基于液滴PCR快速检测单细胞的方法-CN202110028633.3有效
发明人：黄义征;刘文文;胡诗铭;魏清泉;俞育德 -专利权人：中国科学院半导体研究所
申请日： 2021-01-08 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12Q1/686 文献下载
摘要：一种基于液滴PCR快速检测单细胞的方法。该方法包括如下步骤：对经培养、富集的细胞进行固定后，加水重悬得到细胞悬液；将所述细胞悬液与含细胞裂解剂的PCR反应试剂直接混合作为分散相，将油相作为连续相，分别注入微流控芯片生成含单细胞的液滴；对得到的液滴进行PCR反应；对PCR反应后的液滴进行荧光信号检测及分析。本发明极大地简化了液滴制备和操作过程，降低了液滴生成芯片和试剂成本，提高了液滴PCR检测单细胞的速度、通量、灵敏度和特异性。
一种基于 pcr 快速检测单细胞方法

[发明专利]一种牦牛卵泡液外泌体的提取方法及其应用-CN202310321391.6在审
发明人：潘阳阳;许瑞华;王靖雷;余四九;崔燕;刘斌;王萌;王立斌 -专利权人：甘肃农业大学
申请日： 2023-03-29 - 公布日： 2023-07-28 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种牦牛卵泡液外泌体的提取方法及其应用，属于外泌体技术领域。该提取方法将收集的牦牛卵泡液，第一次离心后取上清液一；将上清液一第二次离心取上清液二，之后经第一次超速离心得沉淀一，将沉淀一重悬后第二次超速离心得沉淀二，之后重悬、过滤，获得所述牦牛卵泡液外泌体。本发明提供了一种简单且对技术要求不高的卵泡液外泌体提取方法，并经实验证实该提取方法成功分离牦牛卵泡液外泌体，且得到的外泌体能够提高牦牛卵母细胞成熟率，增强卵子发育潜能，为牦牛的辅助繁殖提供新思路。
一种牦牛卵泡液外泌体提取方法及其应用

[发明专利]人子宫腺肌病异位上皮及间质细胞分离培养方法-CN202310058202.0在审
发明人：张信美;方舟;王建章;李田田 -专利权人：浙江大学医学院附属妇产科医院
申请日： 2023-01-19 - 公布日： 2023-06-13 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：包括：收集子宫腺肌病灶异位内膜组织，配置I型胶原酶；配置12％FBS的双抗DMEM/F12完全培养基；将子宫腺肌病灶异位内膜组织离心弃上清，剪碎组织，再次离心并弃上清，收集沉淀物，加入配置好的I型胶原酶重悬，通过摇床振荡消化，待组织块明显缩小或消失，且I型胶原酶液明显变浑浊加入12％FBS的双抗DMEM/F12完全培养基；通过第一无菌细胞滤网过滤，PBS冲洗滤网，离心弃上清，用DMEM/F12完全培养基重悬细胞沉淀；通过第二无菌细胞滤网过滤细胞悬液，滤网上层为上皮细胞，滤网下层为间质细胞；分别收集离心后的细胞，用12％的FBS的双抗DMEM/F12完全培养基重悬，进行细胞培养，获得子宫腺肌病灶异位上皮及间质细胞。
人子宫腺肌病异位上皮间质细胞分离培养方法

[发明专利]一种大鼠海绵体神经来源施旺细胞的提取纯化和培养方法-CN202210137145.0在审
发明人：汤育新;李子太宇;叶昆;向亚利;肖明;谢能庆;戴英波 -专利权人：中山大学附属第五医院
申请日： 2022-02-15 - 公布日： 2022-06-14 - 主分类号： C12N5/079 文献下载
摘要：本发明涉及施旺细胞的培养，具体是一种大鼠海绵体神经来源施旺细胞的提取纯化和培养方法，其包括取大鼠的海绵体神经；剥离上述海绵体神经上附着的血管与结缔组织；将剥离干净的海绵体神经进行组织消化，消化后轻柔吹打消化液至未见明显组织块，以制备成单细胞悬液；将上述单细胞悬液过滤，滤液离心得到沉淀，然后用含FBS的DMEM高糖培养基重悬沉淀；再取重悬液培养，纯化、扩增培养，得到施旺细胞。
一种大鼠海绵神经来源细胞提取纯化培养方法