本发明属于化学催化与酶催化交叉领域，涉及氨基酸脱氢酶突变体及其应用，具体涉及有机合成、枯草芽孢杆菌亮氨酸脱氢酶(leucine dehydrogenase from B.subtilis,BsLDH)的突变改造、底物α‑酮酸及其衍生物的不对称还原氨化，以及手性非天然氨基酸的化学‑酶法连续反应制备过程。本发明公开的突变体，能够催化多种α‑酮酸类化合物的立体选择性还原氨化，合成结构多样的非天然氨基酸。该突变体基因经过重组、转化，在E.coli Rosseta(DE3)中表达，并将其与葡萄糖脱氢酶(GDH)组成辅酶循环体系用于催化α‑酮酸及其衍生物得到手性非天然氨基酸。同时，本发明以甲基酮类化合物为起始原料，构建了立体选择性制备手性非天然氨基酸的化学酶法反应过程。
本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种假单胞菌水解脱卤酶的编码基因、表达所述假单胞菌水解脱卤酶的重组表达载体、表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌、基因工程菌的发酵培养方法和利用表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌制备法匹拉韦中间体的方法假单胞菌水解脱卤酶基因序列如SEQ ID NO.1所示。与现有技术相比，本发明首次利用假单胞菌水解脱卤酶催化制备法匹拉韦中间体，并使假单胞菌水解脱卤酶基因能够在工程菌中实现高效表达。在优选条件下酶活性可以达到214.5U/L，催化制备法匹拉韦中间体效率高，底物转化率可达97.2％，具有较好的应用前景。
