本发明公开了鸡MHC B‑G座位全序列测定和SNP检测方法及试剂盒,属于生物技术领域。检测方法包括:(1)引物设计:设计鸡MHC B‑G座位全序列测定的特异性引物,特异性引物包括SEQ ID NO 1‑12;(2)DNA提取:从鸡全血中提取DNA;(3)PCR扩增;(4)琼脂糖胶电泳检测;(5)对目的片段进行克隆、测序;(6)SNP分析:所获序列用Clustalw软件进行比对,与Genbank基因序列进行比较,统计单倍型和单核苷酸多态性(SNP)。本发明为测定鸡MHC B‑G座位基因全序列,分析鸡MHC B‑G座位遗传多样性提供了技术平台。
本发明公开了一种鸡mtDNA Cytb基因全序列的扩增及测序方法和专用引物。鸡mtDNA Cytb基因全序列的扩增及测序用引物,见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3。扩增及其测序方法,包括以下步骤:(1)提取鸡羽毛中的DNA,并检测质量;(2)在鸡mtDNA Cyt b基因基因上下游保守区域设计一对所述PCR引物(SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2);(本发明的检测方法具有速度快、成本低、易掌握等优点,所获得的mtDNA Cytb基因全序列可以应用于鸡遗传资源多样性评估、母系起源、系统进化分析和种质资源鉴定与保护等多个领域。
本发明公开了一种鸡mtDNA D‑loop区全序列扩增及测序方法和专用引物,属于鸡线粒体基因组研究领域。鸡mtDNA D‑loop区全序列扩增及测序用引物,见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3。扩增及测序方法,包括以下步骤:(1)提取鸡羽毛中的DNA,并检测质量;(2)在鸡mtDNA D‑loop区上下游保守区域设计一对PCR引物(见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2),通过本发明的检测方法具有速度快、成本低、易掌握等优点,所获得的mtDNA D‑loop区全序列可以应用于鸡遗传资源多样性评估、母系起源、系统进化分析和种质资源鉴定与保护等多个领域。
本发明属于兽用生物制品领域,涉及一种基因编码序列为SEQ ID NO.2的蛋白的鸡肾型传染性支气管炎病毒毒株以及其致弱毒株,其致弱毒株是通过在鸡胚中将该毒株连续传代至第110‑140代次所得。本发明还涉及使用该毒株、其致弱毒株及其抗原蛋白制备的疫苗组合物、制备方法和应用,其制备的含灭活全病毒抗原、活的减毒全病毒抗原、含亚单位抗原的疫苗组合物能有效预防鸡肾型传染性支气管炎相关疾病。