本发明公开了一种抗H5N1型禽流感病毒的小羊驼VHH重链抗体,所述小羊驼VHH重链抗体选自SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列,所述的SEQ ID NO.1~SEQ IDNO此外,本发明还公开了上述抗H5N1型禽流感病毒的小羊驼VHH重链抗体的制备方法,该方法通过引物设计、PCR条件、连接和转化来保证抗体库的容量和多样性,构建了抗H5N1型禽流感小羊驼VHH型抗体库;然后通过优化的抗体库的固相筛选此外,本发明还公开了上述小羊驼VHH重链抗体在H5N1型禽流感病毒凝集素血凝抑制中的应用。