本发明属于病毒载体领域,具体涉及一种WPRE突变体病毒载体及其应用,所述WPRE突变体病毒载体包括WPRE突变体‑03,其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,其构建方法包括:S1:制备随机突变目的片段;S2:随机突变目的片段与能表达荧光蛋白的目的载体连接;S3:涂平板后流式细胞仪筛选细胞;S4:抽提筛选得到的细胞基因组,使用PCR技术扩增WPRE区域;S5:连接T载体后涂板获得克隆细胞,进行测序,得到WPRE突变体病毒载体。本发明中发明人通过大量的创新性劳动,设计并构建了一个WPRE随机点突变病毒文库,通过文库筛选发现一种新的WPRE突变体病毒载体,其对病毒包装有明显促进作用。
本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析,选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列,在对该序列DNA进行化学合成时,采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变,并将合成好的随机片段通过同源重组的方法,对野生酶的相同片段进行替换,构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库,通过二代测序对库容量进行检测,并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选,初筛到了5株酶活有所提升的漆酶,经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123,其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。