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[发明专利]利用大肠杆菌纯化和提高切割蛋白酶活性的方法-CN201410442218.2在审
发明人：朱丹;曹林 -专利权人：天津舒伯格文科技有限公司
申请日： 2014-09-02 - 公布日： 2016-04-06 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用大肠杆菌纯化和提高切割蛋白酶活性的方法，该方法利用大肠杆菌通过分子克隆、融合蛋白、蛋白表达、蛋白纯化和酶活测定五个步骤重组表达切割蛋白酶。本发明的有益效果是，酶切效率高，重组周期短。
利用大肠杆菌纯化提高切割蛋白酶活性方法

[发明专利]一种大肠杆菌重组菌株、其制备方法和应用-CN202210659732.6有效
发明人：陈旭;张旭家;张媛媛;翟鹏;王作斌;曾伶俐 -专利权人：北京质肽生物医药科技有限公司
申请日： 2022-06-13 - 公布日： 2022-08-09 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明提供了一种大肠杆菌重组菌株、其制备方法和应用，具体地，改造大肠杆菌B菌系ompC位点，恢复ompC蛋白的完整性，及ompC和ompF两个膜通道蛋白的表达调控机制。改造后的新菌种可以提高重组蛋白的表达量及分泌效率。
一种大肠杆菌重组菌株制备方法应用

[发明专利]利用木糖代谢产丁二酸大肠杆菌基因工程菌的构建方法-CN201110200742.5无效
发明人：姜岷;刘嵘明;梁丽亚;马江锋;陈可泉;韦萍 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2011-07-18 - 公布日： 2011-12-28 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及利用木糖代谢产丁二酸大肠杆菌基因工程菌的构建方法及其发酵生产丁二酸的方法。本发明通过分子生物学手段改造大肠杆菌的ATP生物合成途径，过量表达与该途径有关的酶的活性，有效的提高了大肠杆菌胞内ATP的总量，使重组大肠杆菌能够利用木糖代谢生长，大幅度提高了丁二酸的合成效率。
利用代谢产丁二酸大肠杆菌基因工程构建方法

[发明专利]月季RcHsp17.8编码序列及其应用-CN200710041158.3无效
发明人：胡永红;明凤;蒋昌华 -专利权人：上海植物园;复旦大学
申请日： 2007-05-24 - 公布日： 2008-01-09 - 主分类号： C12N15/29 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学、基因工程技术领域，具体提供了一种在月季中表达的RcHsp17.8编码序列及其在提高大肠杆菌BL21温度耐受性的应用。本发明涉及包含上述基因的重组表达载体。还涉及所说的表达载体转化大肠杆菌BL21。本发明将所说基因在原核生物(大肠杆菌BL21)中表达，所获得的大肠杆菌BL21耐热性与耐冷性显著增高。
月季 rchsp17 编码序列及其应用

[发明专利]基于CRISPR技术对大肠杆菌K4进行基因插入的方法-CN202011384236.1在审
发明人：尹鸿萍;朱岩;王莹 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2020-12-01 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了基于CRISPR技术对大肠杆菌K4进行基因插入的方法。本发明涉及生物技术基因编辑领域，具体涉及基于CRISPR/Cas9系统的外源基因靶向大肠杆菌中染色体的方法。本发明方法包括：利用导入的λRed同源重组系统和CRISPR系统实现在大肠杆菌K4的LacZ基因中插入靶基因。本发明建立了一种高效、简单的将大肠杆菌传统基因编辑技术与CRISPR系统相结合的靶基因定位插入方法。与现有大肠杆菌K4基因编辑方法相比，本发明提供的方法能够在大肠杆菌中实现高效准确的目的基因插入工作。
基于 crispr 技术大肠杆菌 k4 进行基因插入方法

[发明专利]基于CRISPR技术对大肠杆菌K4进行基因插入的方法-CN202011479939.2在审
发明人：尹鸿萍;朱岩;王莹 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2021-03-23 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了基于CRISPR技术对大肠杆菌K4进行基因插入的方法。本发明涉及生物技术基因编辑领域，具体涉及基于CRISPR/Cas9系统的外源基因靶向大肠杆菌中染色体的方法。本发明方法包括：利用导入的λRed同源重组系统和CRISPR系统实现在大肠杆菌K4的LacZ基因中插入靶基因。本发明建立了一种高效、简单的将大肠杆菌传统基因编辑技术与CRISPR系统相结合的靶基因定位插入方法。与现有大肠杆菌K4基因编辑方法相比，本发明提供的方法能够在大肠杆菌中实现高效准确的目的基因插入工作。
基于 crispr 技术大肠杆菌 k4 进行基因插入方法

[发明专利]用于生产异丁烯的方法和组合物-CN202180040927.6在审
发明人： B·布里格斯 -专利权人：阿拉斯加大学安克雷奇分校
申请日： 2021-04-15 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N9/12 文献下载
摘要：公开了包含第一大肠杆菌同源区和第二大肠杆菌同源区的核酸序列，其中所述第一大肠杆菌同源区包含原间隔子相邻基序(PAM)突变；组成型启动子；甲羟戊酸‑3‑激酶(M3K)基因；甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MVD)基因公开了包含核酸序列的重组细胞，其中所述核酸序列包含第一大肠杆菌同源区和第二大肠杆菌同源区，其中所述第一大肠杆菌同源区包含PAM突变；组成型启动子；M3K基因；MVD基因。
用于生产异丁烯方法组合

[发明专利]一种生物正交反应固定细菌用于超灵敏荧光计数免疫分析的检测方法-CN202211308611.3在审
发明人：宋玉君;李莞琦 -专利权人：南京大学
申请日： 2022-10-25 - 公布日： 2023-01-13 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明公开了一种生物正交反应固定细菌用于超灵敏荧光计数免疫分析的检测方法，包括如下步骤：(1)重组质粒转化至大肠杆菌，并用IPTG诱导转入T启动子转录，诱导大肠杆菌表达绿色荧光蛋白；(2)用抗坏血酸解离Cu‑MOF纳米颗粒，叠氮化大肠杆菌修饰的叠氮基团与炔基化牛血清蛋白上的炔基结合，将叠氮化大肠杆菌固定在孔板上；(3)通过发光大肠杆菌的自繁殖放大信号，将生物标志物的浓度转换为荧光大肠杆菌的荧光亮点，从而实现定量检测
一种生物正交反应固定细菌用于灵敏荧光计数免疫分析检测方法

[发明专利]一种过表达GatA基因的重组大肠杆菌及其应用-CN202011272713.5有效
发明人：张娟;杨谨华;堵国成;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-11-12 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种过表达GatA基因的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明以述半乳糖醇特有的IIA组分的gatA基因为目的基因，以大肠杆菌为表达宿主，成功构建了一类可广泛应用于制备药品、饲料以及化学品的大肠杆菌工程菌；此大肠杆菌工程菌的衣康酸胁迫抗性得到了显著提高，较野生菌株最高提高了29.4倍，此大肠杆菌工程菌的D‑乳酸胁迫抗性得到了显著提高，较野生菌株最高提高了101倍；此大肠杆菌工程菌的琥珀酸胁迫抗性得到了显著提高，较野生菌株最高提高了1.6倍。
一种表达 gata 基因重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种生物鲁棒性提高的大肠杆菌底盘细胞及其构建方法与应用-CN202010661070.7有效
发明人：付晓平;郑宏臣;宋诙;束文举;甄杰;谭明;徐健勇 -专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2020-07-10 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种生物鲁棒性提高的大肠杆菌底盘细胞及其构建方法与应用。本发明提供了一种单独或同时过表达大肠杆菌本源的基因prpD和malK的方法，构建一生长速率加快、ATP能量供应稳定充足、乙酸积累受抑制的鲁棒性能提高的大肠杆菌底盘细胞，利用该大肠杆菌底盘细胞表达外源蛋白其表达量可提高本发明的大肠杆菌底盘细胞适用于植物、微生物等不同来源的外源蛋白在大肠杆菌中的表达，解决了因更换不同重组目标蛋白而需对宿主菌重新改造的问题，且该方法工艺简化、通用性高、便于实验研究及工业化放大应用。
一种生物鲁棒性提高大肠杆菌底盘细胞及其构建方法应用

[发明专利]基于脂肪酶大肠杆菌表面展示菌株的丁酸丁酯合成方法-CN202210051005.1有效
发明人：信丰学;姜岷;陈泓羽;陆家声;蒋羽佳;姜万奎;章文明 -专利权人：南京工业大学
申请日： 2022-01-17 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及基于脂肪酶大肠杆菌表面展示菌株的丁酸丁酯合成方法，在产丁酸丁酯菌株发酵阶段，加入脂肪酶表面展示大肠杆菌的发酵液或同体积脂肪酶表面展示大肠杆菌发酵液离心后收集所得菌体沉淀；所述脂肪酶表面展示大肠杆菌构建方式为：将脂肪酶lipA的编码基因和锚定蛋白estA的编码基因克隆到表达载体上，构建得到的重组质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞，挑选阳性克隆，即所述脂肪酶表面展示大肠杆菌。
基于脂肪酶大肠杆菌表面展示菌株丁酸合成方法

[发明专利]施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI-RE蛋白在介导同源重组上的应用-CN202111318814.6有效
发明人：冯雁;黄飞 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2021-11-09 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C07K14/21 文献下载
摘要：本发明涉及施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白在介导同源重组上的应用。本发明研究发现所述施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白影响DNA复制以及DNA损伤修复途径；本发明公开了施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白介导的大肠杆菌基因敲除技术的构建和应用。本发明首先构建施氏假单胞杆菌来源的PsPIWI‑RE蛋白表达质粒和带有待敲除把基因序列左右同源臂序列的重组质粒；随后用两个质粒转化大肠杆菌，诱导双交换重组，通过表型筛选或PCR鉴定获得敲除靶基因的菌株。为大肠杆菌等微生物的基因编辑提供新的优良工具。
施氏假单胞杆菌来源 pspiwi re 蛋白同源重组应用

[发明专利]一种双歧杆菌－大肠杆菌穿梭表达载体pBES、双歧杆菌－ETEC CFA/I重组载体及其用途-CN200710092976.6有效
发明人：马永平;宋方洲 -专利权人：重庆医科大学
申请日： 2007-11-13 - 公布日： 2008-05-21 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种双歧杆菌－大肠杆菌穿梭表达载体pBES以及由其构建的双歧杆菌－ETEC CFA/I重组载体、双歧杆菌－ETEC CFA/I重组载体口服活疫苗及其用途。所述的pBES载体是由GenBank号为U13856的pGEX－5x－1为骨架改造而来；所述的双歧杆菌－大肠杆菌穿梭表达载体pBES用于以双歧杆菌为受体菌的所有外源基因的表达。用上述双歧杆菌－大肠杆菌穿梭表达载体pBES构建的双歧杆菌－ETEC CFA/I重组载体；所述的ETEC CFA/I为人的ETEC CFA/I。上述双歧杆菌－ETEC CFA/I重组载体构建的口服活疫苗；上述双歧杆菌－ETEC CFA/I重组载体口服活疫苗的应用，用于预防和治疗ETEC引发腹泻性疾病。本发明可以通过基因工程手段让双歧杆菌替代传统的ETEC疫苗中CFA/I的受体菌，既解决了活疫苗构建的载体系统的安全性问题，又发挥了双歧杆菌抑制肠道病原菌的微生态效应。
一种杆菌大肠杆菌穿梭表达载体 pbes etec cfa 重组及其用途

[发明专利]可表达和分泌β－半乳糖苷酶的大肠杆菌－乳酸菌穿梭质粒及其构建方法与应用-CN200710048430.0无效
发明人：汪川;张朝武;刘衡川;余倩;许欣;裴晓方;王国庆;林怡伶 -专利权人：四川大学
申请日： 2007-02-08 - 公布日： 2007-09-12 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：一种可表达和分泌β－半乳糖苷酶的大肠杆菌－乳酸菌穿梭质粒，所含基因由编码β－半乳糖苷酶的基因及该基因上游含SD位点的调控序列组成。实验证明，上述重组质粒可转化乳酸乳球菌，在大肠杆菌和乳酸乳球菌中高效表达非融合β－半乳糖苷酶，在β－半乳糖苷酶制备和构建可表达β－半乳糖苷酶的乳酸菌株中应用。构建方法包括以下步骤：以德氏乳杆菌保加利亚亚种基因组DNA为模板，扩增得到含上游调控序列的β－半乳糖苷酶基因；将上述扩增得到的β－半乳糖苷酶基因双酶切后与用同种酶双酶切并去磷酸化的载体连接并转化感受态大肠杆菌；筛选阳性大肠杆菌，提取阳性大肠杆菌中重组质粒酶切鉴定并对插入序列进行测序。
表达分泌半乳糖大肠杆菌乳酸菌穿梭质粒及其构建方法应用

[发明专利]人骨形态发生蛋白9重组蛋白质核苷酸序列及生产方法和用途-CN200610050518.1无效
发明人：陈棣;耿健晨;李恒林;鲍忆 -专利权人：嘉兴波亿生物科技开发有限公司
申请日： 2006-04-26 - 公布日： 2006-10-11 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种人骨形态发生蛋白9重组蛋白质核苷酸序列及生产方法和用途。一种分离的DNA分子，它编码人骨形态发生蛋白9(BMP－9)核苷酸序列。一种蛋白质：哺乳细胞及大肠杆菌表达人骨形态发生蛋白9重组蛋白质。一种载体：将编码BMP－9核苷酸序列基因段重组于质粒载体，当该质粒载体在哺乳细胞和大肠杆菌扩增时，重组BMP－9得以表达。一种宿主细胞：使重组BMP－9在其表达的哺乳细胞及大肠杆菌宿主细胞。人骨形态发生蛋白9重组蛋白质用于制备刺激成骨细胞分化和新骨形成、促进骨折愈合，治疗骨折、骨缺损疾病的药物。本发明的优点是：1.利用哺乳细胞和大肠杆菌首次成功表达人BMP－9重组蛋白质；2.BMP－9重组蛋白质具有刺激骨形成，促进骨缺损和骨折修复的功能。
形态发生蛋白重组蛋白质核苷酸序列生产方法用途