本发明公开了一种用于关节软骨缺损修复的生物制剂、制备方法及其应用。制剂包括活性成分mRNA,如SEQ ID NO:1所示或者相似度达90%以上的序列;方法包括合成DNA片段,将DNA片段克隆至表达质粒获得重组质粒,将重组质粒转入宿主细胞获得重组细胞,从重组细胞中提取质粒,PCR扩增获得DNA模板,利用DNA模板构建RNA体外合成体系并进行RNA体外合成获得活性成分mRNA;在用于软骨修复的制药中的应用。本发明使用体外转录法合成化学修饰的FoxO1mRNA基因,将制剂注射于关节软骨缺损处,能促进内源性间充质干细胞成软骨分化;其生物活性优良,在组织工程中具有应用价值。
本发明公开了一种表达软骨素6‑硫酸转移酶基因的重组菌及其应用,属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌或枯草芽孢杆菌为宿主,表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的软骨素6‑硫酸转移酶基因,构建得到四株重组菌,实现了软骨素6‑硫酸转移酶的高效表达,最终酶活分别达到了36.3U/mL、以该酶为催化剂,软骨素为底物一步催化合成硫酸软骨素C,最终转化效率达到了80%。本发明方法在工业上用于硫酸软骨素C的合成具有潜在且非常广泛的价值。