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[发明专利]蛋白A功能结构域－荧光蛋白的融合蛋白及其构建方法-CN200410054330.5无效
发明人：钱旻;张小平;杜冰 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2004-09-07 - 公布日： 2005-05-18 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供一种蛋白A功能结构域—荧光蛋白的融合蛋白及其构建方法，属于分子药理学生物技术领域。本发明所述的蛋白A功能结构域—荧光蛋白的融合蛋白是由蛋白A功能结构域与荧光蛋白融合而成。其构建方法为双酶切蛋白A基因，回收得到蛋白A功能结构域；双酶切含有荧光蛋白的质粒载体；将双酶切的两产物连接在一起形成重组质粒，再转化感受态细胞。构建的蛋白A片断－增强型荧光蛋白的融合蛋白兼有蛋白A可以与大多数哺乳动物IgG的Fc段非特异结合，以及增强型荧光蛋白的强荧光，不影响与其连接的目的基因的表达，可以作为简便快速的免疫检测通用试剂，而且构建的融合蛋白性质稳定
蛋白功能结构荧光融合及其构建方法

[发明专利]一种毕赤酵母高效基因敲除方法-CN201810853635.4在审
发明人：李莉玲 -专利权人：惠州卫生职业技术学院
申请日： 2018-07-30 - 公布日： 2018-12-25 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明提供一种毕赤酵母高效基因敲除方法，其特征在于，包含以下步骤：S1.通过质粒pYES2构建敲除质粒pGE1203‑ADE‑URA3；S2.将敲除质粒分别敲入所述毕赤酵母组中目标基因och 1的上游、下游；S3.具有敲除质粒活性的蛋白质识别、剪切所述核苷酸序列，敲除所述目标基因och 1，获得敲除所述目标基因och 1的毕赤酵母。本发明有效改善毕赤酵母对蛋白的糖基化修饰，解决融合蛋白过度糖基化的问题，对毕赤酵母och1基因进行了高效敲除。
敲除毕赤酵母质粒目标基因高效基因蛋白质识别过度糖基化核苷酸序列糖基化修饰融合蛋白剪切构建蛋白上游

[发明专利]一种表达乙肝表面抗原的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用-CN201410202050.8在审
发明人：陈坚;堵国成;康振;钱俊佳;邱玲 -专利权人：江南大学;希森美康生物科技(无锡)有限公司
申请日： 2014-05-13 - 公布日： 2014-08-27 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明采用重组DNA技术将乙肝表面抗原编码基因HBsAg及酿酒酵母的蛋白二硫键异构酶基因pdi克隆到酿酒酵母表达载体pTEF1，分别构建共表达重组质粒及融合表达重组质粒，并转化Saccharomyces cerevisiae INVscI，共表达及融合表达PDI均能有效促进HBsAg的表达，且融合表达方式优于共表达。所获得融合表达PDI的重组酵母菌INVscI/p-pdiLsAg表达的HBsAg活性达84.50IU/g干重，较初始菌INVscI/p-sAg(9.66IU/g干重)提高了7.75倍。
一种表达乙肝表面抗原酿酒酵母工程及其构建方法应用

[发明专利]一种表达GnRH/M₂融合多肽的重组工程菌株及其构建和应用-CN201510458317.4在审
发明人：曹荣月;马云菲;李曼曼;俞敏霞;张昕黎;袁玉婷;苗梓韬 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2015-07-29 - 公布日： 2015-12-23 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：该大肠杆菌工程菌株携带有能表达ansB-C-GnRH₃-hinge-MVP-M₂融合多肽的重组质粒。本发明通过PCR法分别克隆出ansB-C-GnRH₃-hinge-MVP和M₂基因片段，依次将这两段基因片段插入到空载体质粒pET28a中，并转化到大肠杆菌。使其能够表达重组蛋白，经过分离纯化并去除融合伙伴后获得GnRH₃-hinge-MVP-M₂融合多肽。通过本发明制备的重组大肠杆菌工程菌株及其表达的融合多肽能应用于抗肿瘤治疗中。
一种表达 gnrh sub 融合多肽重组工程菌株及其构建应用

[发明专利]一种基于过滤法的寡肽合成及纯化方法-CN202210415907.9在审
发明人：江翱;张志乾;吴奕瑞;刘丽花;胡玉成;王海梅;姚宛菲;王嘉鹏 -专利权人：广州市乾相生物科技有限公司
申请日： 2022-04-20 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本申请提供了寡肽合成及纯化方法，包括：构建含有融合蛋白的表达载体质粒，融合蛋白由相互串联的内含肽和目标寡肽组成；将表达载体质粒转化至宿主菌中，并使宿主菌表达融合蛋白；将表达融合蛋白的宿主菌依次进行破碎和第一次过滤处理
一种基于过滤寡肽合成纯化方法

[发明专利]一种智能工程细菌系统及其制备和在抗肿瘤药物中的应用-CN202211274492.4在审
发明人：张成;马立新;许文轩;任德宝 -专利权人：湖北大学
申请日： 2022-10-18 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种智能工程细菌系统及其制备和在抗肿瘤药物中的应用，所述智能工程细菌系统为装载有质粒的细菌，所述细菌对肿瘤组织具有趋向作用，所述质粒包含编码融合蛋白的基因片段，所述融合蛋白由所述细菌分泌表达，所述融合蛋白包含蛋白A、抗肿瘤肽以及连接二者且能被基质金属酶‑2靶向切割的基质金属酶‑2敏感肽，所述蛋白A能失活所述抗肿瘤肽。上述智能工程细菌系统在体外诱导表达融合蛋白后，将其注射入荷瘤小鼠体内，可在乏氧及免疫抑制驱动下细菌趋向并定殖于肿瘤部位，利用肿瘤部位高表达的基质金属酶‑2将敏感肽切断，使得抗肿瘤肽活性得以恢复并在肿瘤局部精准释放
一种智能工程细菌系统及其制备肿瘤药物中的应用

[发明专利]一种SM融合抗原及抗Sm抗体化学发光检测试剂盒-CN202211321699.2在审
发明人：钟铃;周鹏程;赖华 -专利权人：广东优尼德生物科技有限公司
申请日： 2022-10-26 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于基因工程及医学检测技术领域，公开了一种Sm融合抗原及抗Sm抗体化学发光检测试剂盒。通过融合蛋白序列设计：人工合成SmB除去脯氨酸富集区的剩余序列+SmD1+SmD2+SmD3最高抗原原性序列的基因，然后克隆至大肠杆菌表达载体，得到重组质粒；将重组质粒转化至感受态细胞进行表达，得到Sm融合抗原。所述抗Sm抗体化学发光检测试剂盒包括包被Sm融合抗原的磁性微球反应液、吖啶酯或吖啶磺酰胺标记的羊抗人IgG抗体和发光底物。
一种 sm 融合抗原抗体化学发光检测试剂盒

[发明专利]HPV58E6特异性兔单克隆抗体及其制备方法与应用-CN201510054024.X有效
发明人：吕卫国;邹健;程晓东;李阳;章鉴洋;谢幸 -专利权人：浙江大学医学院附属妇产科医院
申请日： 2015-02-03 - 公布日： 2018-04-03 - 主分类号： C07K16/08 文献下载
摘要：将合成好的多肽抗原免疫新西兰大白兔，测定血清滴度，Western Blot检测抗体特异性，然后将脾细胞与融合伴侣细胞进行细胞融合培养后，取上清检测抗体滴度及特异性,筛选出特异度及效价最好的融合细胞,将融合细胞裂解提取RNA，做RT‑PCR，获得抗体重轻链cDNA,构建入pTT5质粒载体，将包含重轻链质粒共转染到HEK‑293‑6E细胞进行表达获得重组抗体，即为HPV58‑E6单克隆抗体。
hpv58e6 特异性单克隆抗体及其制备方法应用

[发明专利]重组人胰岛素的制备方法-CN201810938962.X有效
发明人：龙乔明 -专利权人：苏州大学
申请日： 2018-08-17 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组人胰岛素的制备方法：以pET‑SUMO为载体，将SEQ ID No.2所示的核苷酸序列插入pET‑SUMO载体的EcoRI和HindIII酶位点之间，得到重组质粒；将重组质粒转入宿主菌中，在18‑37℃下在培养基中生长至OD600＝0.5‑0.7，诱导表达后，分离出Sumo‑胰岛素原融合蛋白包涵体；用含有尿素的缓冲液洗涤Sumo‑胰岛素原融合蛋白包涵体，离心后取沉淀，变性、梯度复性后，得到复性Sumo‑胰岛素原融合蛋白；利用Sumo蛋白酶、胰蛋白酶和羧肽酶B在pH＝6.0‑8.0条件下一步酶切复性Sumo‑胰岛素原融合蛋白，酶切温度为16‑37℃，酶切时间为
重组胰岛素制备方法

[发明专利]一种过表达融合蛋白PTGFRN-GLP-1工程化外泌体的制备方法及其应用-CN202210887221.X有效
发明人：刘洪玉;姜舒;张芸;纪惜銮 -专利权人：深圳市茵冠生物科技有限公司
申请日： 2022-07-26 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种过表达融合蛋白PTGFRN‑GLP‑1工程化外泌体的制备方法及其应用。本发明通过天然的GLP‑1与外泌体支架蛋白PTGFRN连接构成融合蛋白，将其导入pcDNA3.1质粒构建融合表达载体，然后将质粒导入DH5α大肠杆菌感受态细胞中扩增，当干细胞汇合度达70‑80%时，将pcDNA3.1‑PTGFRN‑GLP‑1融合表达载体转染入干细胞中，收集转染后干细胞的培养上清，并进一步浓缩纯化即得。
一种表达融合蛋白 ptgfrn glp 工程化外制备方法及其应用

[发明专利]兔出血症病毒新型亚单位疫苗及其制备方法-CN201210488446.4无效
发明人：刘光清;程英杰;孟春春;陈宗艳;李传峰 -专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所
申请日： 2012-11-26 - 公布日： 2013-02-27 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种兔出血症病毒新型亚单位疫苗的重组表达质粒，所述的重组表达质粒中含有一个包括下列元件的融合编码基因：(1)如SEQ ID NO：1所示的兔出血症病毒的优势抗原区A，(2)如SEQ ID NO：2所示的兔出血症病毒的优势抗原区B，优选的，上述融合编码基因还包括编码序列为SEQ ID NO：3所示的Th通用细胞表位，所述的融合编码基因是由插入元件按A-B-Th顺序串联而成。本发明的疫苗融合了兔出血症病毒的优势抗原区域和通用Th细胞表位，既可以刺激机体产生体液免疫应答，又能刺激机体产生细胞免疫应答，可以用于预防兔出血症病毒感染性疾病，该疫苗安全、免疫效果好，适于产业化生产。
出血病毒新型单位疫苗及其制备方法

[发明专利]一种靶向融合防龋DNA疫苗及制备方法-CN02139118.1无效
发明人：樊明文;边专;郭继华;贾荣;陈智;彭彬;范兵 -专利权人：武汉大学
申请日： 2002-09-29 - 公布日： 2003-12-03 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种靶向融合防龋DNA疫苗及制备方法，大肠杆菌(Esherichiacoli)JM109/pGJA－PCCTCCNO：M202037。再将pJIg质粒中的Igγ1铰链区、恒定区基因序列与pGCTLA粒连接，构建出编码细胞毒性T淋巴细胞抗原4信号肽、胞外区的序列和Igγ1铰链区、恒定区融合基因的重组质粒pGJ。酶切鉴定插入片段的正确性，然后将融合基因插入pGLUA－P的前端，获得靶向融合防龋DNA疫苗pGJA－P。本发明方法简单，安全性高，生产成本低廉，可大幅度提高其免疫效能。
一种靶向融合防龋 dna 疫苗制备方法

[发明专利]用于类风湿关节炎基因治疗的重组腺病毒载体-CN200610050324.1无效
发明人：冷建杭;姚航平 -专利权人：杭州市第一人民医院;浙江大学医学院附属第一医院
申请日： 2006-04-11 - 公布日： 2006-11-08 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于类风湿关节炎基因治疗的重组腺病毒载体，步骤是：1)将小鼠脾细胞RNA逆转录成为cDNA后，用聚合酶扩增出IL－18BP，IL－4基因序列，并用直链氨基酸接头构建成IL－18BP与IL－4融合基因；2)将融合基因和穿梭载体pShuttle－CMV质粒用BglII和HindIII双酶切后利用T4DNA连接酶进行连接，获得连接产物PSC－IL－18BP/IL－4；3)将连接产物和对照质粒PSC－LacZ电转化入BJ5183－AD－1感受态细菌中后获得AD－IL－18BP/IL－4和AD－LacZ对照腺病毒载体质粒；4)扩增经鉴定正确的腺病毒载体质粒，用PacI酶切纯化后将质粒转入AD293细胞中，当出现细胞病变效应时
用于类风湿关节炎基因治疗重组病毒载体

[发明专利]表达PEDV的M+N双基因的原核融合表达载体及应用-CN201710581129.X在审
发明人：王隆柏;陈秋勇;吴学敏;王晨燕;周伦江;车勇良;刘玉涛 -专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2017-07-17 - 公布日： 2017-11-28 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M+N双基因的原核融合表达载体。通过PEDV的M和N基因片段，利用Blunt‑E2表达载体，通过无缝克隆技术，构建出表达PEDV的M+N双基因的原核融合表达载体，并提供了其在基因工程蛋白重组表达中的应用。本发明是直接将纯化PEDV的M基因片段连接到Blunt‑E2哺乳动物原核融合表达载体中，不需要连接至单克隆载体PMD19‑T中，然后M+Blunt‑E2质粒通过同源重组技术，无缝拼接N基因片段，从而获得M+N双基因融合表达载体，其质粒通过PCR技术进行鉴定，测序准确后再转染在细胞中获得成功表达。因此，该原核融合表达载体的制备比较其他原核融合表达技术，具有操作步骤简单、反应时间短等特点。
表达 pedv 基因融合载体应用

[发明专利]一种蜜蜂肽表达载体及其构建方法和应用-CN201410654343.X有效
发明人：武刚;祝发明;刘文庆;朱剑 -专利权人：张掖奥谱生物科技有限公司
申请日： 2014-11-18 - 公布日： 2019-01-25 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：构建方法包括如下步骤：1)合成含编码NTEV蛋白酶的表达操纵子基因；2)合成含编码木聚糖酶与蜜蜂肽的融合蛋白表达操纵子基因；3)分别对步骤1)和2)的表达操纵子基因进行双酶切，构建入载体pBluescriptⅡSK(+)，得到重组质粒；4)提取枯草芽孢杆菌168的基因组DNA，扩增其启动子p43，采用T载体克隆得到含启动子基因质粒，构建入质粒pGJ103，得到质粒pGJ284；通过反向PCR得到含p43启动子部分基因序列的高效启动子序列基因，构建入质粒pGJ284，得到质粒pGJ288；5)分别对上述重组质粒和质粒pGJ288进行双酶切，回收酶切产物后连接，得到蜜蜂肽表达载体。
一种蜜蜂表达载体及其构建方法应用