本发明公开了一种仅具有RNA靶切割活性的原核Argonaute蛋白质在RNA编辑中的应用，所述Argonaute蛋白质来源于中温原核生物Verrucomicrobia bacterium，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示或为与SEQ ID NO:1相似度极高且具有相同功能的蛋白质；该蛋白质对单链向导DNA具有结合活性，并且仅仅只对与单链向导DNA互补配对的RNA靶具有核酸酶活性，故可利用该蛋白质进行体内外靶向RNA编辑，为RNA编辑提供了一个全新的有力工具。
本发明公开了蛋白酶K突变体及其制备方法，属于蛋白质工程技术领域，其中所述突变体为：将如SEQ ID NO.1所示的野生型蛋白酶K的第44位氨基酸突变，具体为将第44位的丙氨酸突变为丝氨酸。本发明以蛋白酶K的晶体结构为基础，通过蛋白质工程和定点突变等技术对蛋白酶K进行改造，首次获得了如SEQ ID NO.3所示的突变体A44S。研究发现该突变体A44S的比酶活较野生型提高约21％，从而降低了蛋白酶K的应用成本，提高了该酶在洗涤、饲料和食品等多种行业的工业应用价值，同时为该酶的催化机理研究提供了重要线索。
本发明公开了一种中高温Argonaute蛋白在特异性切割靶核酸中的应用，所述Argonaute蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该Argonaute蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了上述Argonaute蛋白的体外合成方法，并发现该蛋白对两种向导5’OH‑gRNA和5’P‑gRNA具有结合活性，其能够利用这两种向导去切割靶ssDNA和利用5’OH‑gRNA去切割靶RNA，实现靶向DNA或靶向RNA编辑，同时还可切割质粒。因此，本发明为基于原核生物来源的Argonaute蛋白的基因克隆和分子检测提供了一种新的工具。
本发明公开了具有中温靶核酸切割活性的PfAgo突变体蛋白及其应用，所述PfAgo突变体蛋白相对于SEQ ID NO.1所示序列，具有第617位和/或618位的氨基酸突变，具体为：K617E/G和/或L618Y/F/W/G。相对于野生型PfAgo蛋白，本发明提供的PfAgo突变体蛋白在30～95℃的温度范围均有活性，有效扩展了pAgo蛋白的使用范围。
本发明公开了基于Argonaute蛋白TcAgo的核酸切割体系及其应用，所述核酸切割体系包括向导DNA、Argonaute蛋白TcAgo和报告核酸，所述TcAgo的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或如与SEQ ID NO.1具有至少85％的序列一致性且具有相同功能的序列所示，该核酸切割体系可应用于核酸检测、富集低丰度核酸和基因克隆等生物技术领域，且具有良好的应用前景。
