本发明公开一种脂肪酶基因、重组表达载体、重组表达菌株、脂肪酶及其制备方法、及生物柴油的制备方法，其中，所述脂肪酶基因TLLsyn用于编码脂肪酶，所述脂肪酶基因TLLsyn的核苷酸序列如SEQ ID NO本发明提供的脂肪酶基因TLLsyn，采用了毕赤酵母中的高频密码子替换原有的低频密码子，显著提高了人工合成的脂肪酶基因TLLsyn在毕赤酵母细胞中的表达量；此外，在脂肪酶的制备过程中，将人工合成的脂肪酶基因TLLsyn转入到毕赤酵母中，并结合目的基因的多拷贝构建，提高了脂肪酶基因TLLsyn在脂肪酶中的表达量，并提高了脂肪酶的酶活，其制备工艺简单且产量高，降低了脂肪酶的生产成本。
本发明公开一种耐高温脂肪酶基因tllgold及其应用，其中，所述脂肪酶基因tllgold用于编码耐高温脂肪酶，所述脂肪酶基因tllgold的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的脂肪酶基因tllgold是在原疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的脂肪酶TLL的基础上，通过人工的理性设对TLL进行了定点突变改造，得到改造后的脂肪酶TLLGold氨基酸序列，然后根据该脂肪酶TLLGold的氨基酸序列，人工重新设计脂肪酶基因的核苷酸序列，设计出了新型脂肪酶基因tllgold序列，由该脂肪酶基因tllgold编码所得的脂肪酶TLLGold具有耐高温的特点，在80℃环境下放置12h后仍然可以保持79％的酶活力，能够适用于多种需要脂肪酶耐高温的工业应用场景。
