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- [发明专利]一种筛选酪氨酸酶抑制剂的方法-CN201510394028.2有效
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陈健敏;黄梅萍
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莆田学院
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2015-07-07
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2018-02-23
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G01N21/31
- 本发明公开了一种筛选酪氨酸酶抑制剂的方法，包括将切碎后的双孢蘑菇加入至预冷的pH＝6.8的磷酸缓冲溶液中；将所述磷酸缓冲溶液匀浆处理，然后用尼龙纱布过滤，得到酪氨酸酶的粗提液；在96孔板的每孔中加入所述酪氨酸酶的粗提液，将96也板放入冰箱中进行吸附；配制左旋多巴底物溶液和称取待筛选的酪氨酸酶抑制剂溶液；取步骤三所得到的96孔板，在96孔板上加入底物溶液以及在不同的底物溶液中加入酪氨酸酶抑制剂溶液进行对照培养；比较酪氨酸酶抑制剂与对照组溶液的颜色深浅来判断曲酸对酪氨酸酶的抑制效果本发明通过对酪氨酸酶粗提液的进行吸附，得到较为纯净的固定化的酪氨酸酶，大大简化了酪氨酸酶的提纯步骤。
- 一种筛选酪氨酸抑制剂方法
- [发明专利]一种粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备工艺-CN202111199681.5有效
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邓方;张喆;姚彦林
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巢湖学院
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2021-10-14
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2022-03-22
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C12N9/84
- 本发明公开一种粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备工艺，包括如下步骤：S1、取活化复壮后的粪产碱杆菌接种至盛装种子培养液的培养基中，培养得到种子液；S2、取种子液加入发酵培养液中，发酵得到发酵液；S3、将发酵液先在离心得到湿重菌体，再取湿重菌体悬浮于磷酸缓冲液中，再加入乙酸丁酯得到粗提取溶液，再将粗提取溶液分离提取得到初步酶液；S4、将初步酶液经冰浴、冰浴、超声破碎、离心得到粗酶液；S5、采用阴离子交换层析法，将S4中得到的粗酶液进一步提纯，得到纯酶。本发明通过在发酵液中添加微量元素溶液与基础盐溶液可提高AfPGA产率，同时在发酵液中添加苯乙酰苯基丁氨酸溶液与NIPAB溶液，刺激粪产碱杆菌合成AfPGA，提高AfPGA的活力与酶量。
- 一种粪产碱杆菌青霉素酰化酶制备工艺
- [发明专利]一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺-CN201610198288.7在审
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黄金科
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天津科仪嘉欣科技有限公司
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2016-04-01
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2017-10-24
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C12N9/76
- 本发明属于生物化学药物制药技术领域，具体涉及一种高活性的胰蛋白酶的制备工艺。通过将胰蛋白酶粗品进行溶解得到胰蛋白酶粗品溶解液；将胰蛋白酶粗品溶解液在60-70℃放置0.5-3小时；用磷酸盐缓冲液进行缓冲溶解，使其达到平衡；平衡后，向胰蛋白酶粗品溶解液中加入海藻酸钠和氯化钙溶液，搅拌均匀；向搅拌均匀的溶液中加入戊二醛进行反应，用水去除多余的戊二醛；将溶液装入透析袋，浸于外透液中，过滤得结晶物，加水溶解，调节pH值；将溶液透析，去除杂质；取出透析液，抽滤，得滤液，调节pH值，冻干后得结晶胰蛋白酶成品能够提高胰蛋白酶的活性，提高工作效率。使得到的胰蛋白酶的活性达到4000U/mg以上。
- 一种活性胰蛋白酶制备工艺
- [发明专利]一种天然哺乳动物尿酸酶制备方法-CN201410015218.4有效
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张淳;范开;冯尚彩;刘兆明
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临沂大学
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2014-01-10
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2014-04-30
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C12N9/06
- 一种天然哺乳动物尿酸酶制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)预处理：将新鲜哺乳动物肝脏均质破碎后，用pH值介于7.2-8.8之间的缓冲液洗涤，洗涤沉淀用pH值介于9.7-10.5之间的缓冲液溶解，得尿酸酶初提液；(2)粗纯化：将上述初提液进行硫酸铵分级沉淀及溶解，复溶液进行阴离子交换层析纯化，得尿酸酶粗纯品溶液；(3)精纯化：将上述尿酸酶粗纯品溶液进行亲和层析纯化，得纯度高于97.0％的尿酸酶纯品溶液。该制备方法未包含尿酸酶失活变性步骤、制备周期短、收率高，所得产品酶比活性高、纯度高，可用于天然或重组哺乳动物尿酸酶结构功能、理化性质及免疫原性研究。
- 一种天然哺乳动物尿酸酶制备方法
- [发明专利]蝰蛇蛇毒血凝酶的层析纯化方法-CN02153855.7有效
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许贞玉;钱芳;夏红梅;李兆羿
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合肥兆峰科大药业有限公司
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2002-12-05
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2004-06-16
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C12N9/74
- 注射用蛇毒血凝酶的纯化工艺包括：蛇毒的溶解，亲和层析分离得到类凝血酶和类凝血激酶的粗溶液，超滤浓缩，离子交换层析纯化得到类凝血酶和类凝血激酶的纯溶液，超滤浓缩，凝胶层析获得类凝血酶和类凝血激酶的精纯溶液，最后将上述类凝血酶和类凝血激酶的精纯溶液按一定比例混合后，加入适量的赋形剂、稳定剂，经过滤、灌装、冷冻干燥、轧盖，最终获得注射用蛇毒血凝酶成品等工艺。本工艺采用专一性吸附剂，可以一次性地快速完成大量酶溶液的粗提制备工作，并能最大程度地收集到粗品中的有效成分，且生物活性高。所得注射用蛇毒血凝酶经动物药效学实验，全血凝血时间明显缩短，肝脏切口的失血量明显减少，多种毒素测定结果均为阴性。
- 蝰蛇蛇毒血凝层析纯化方法
- [发明专利]生物活性胶原提取方法-CN201310041670.3有效
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谭荣伟
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深圳兰度生物材料有限公司
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2013-02-02
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2017-06-20
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C12P21/06
- 本发明涉及一种生物活性胶原提纯方法，包括前处理步骤，对新鲜牛跟腱前处理制成碎片备用；酸法粗提步骤，取1重量份碎片加入4~8重量份醋酸或柠檬酸溶液并搅拌，然后经粗过滤、高速离心粗滤液后取上清液备用；酶法去端基步骤，调节上清液pH至9.0，再加入0.1~0.3%重量份的无花果蛋白酶进行酶解消化；梯度盐析步骤，用沉淀剂对酶解后的溶液进行多梯度盐析处理，获得溶解有胶原的溶液；透析步骤，将溶解有胶原的溶液装入透析袋中，依次用醋酸溶液和纯水为透析外液进行透析，得到具有生物活性的胶原原液。本发明结合酸法和酶法两种现有胶原提取方法，既克服了酸法产率低又克服了酶法水解不彻底的缺点，且采用非动物源性蛋白酶，减小了关于动物源性的风险。
- 生物活性胶原提取方法
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