本发明公开了一种用于地中海贫血突变型与缺失型基因检测的引物组、试剂盒及其应用,其中,所述引物组包括如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.32所示的引物;所述试剂盒包括上述的引物组。本发明针对HBA1和HBA2以及HBB三个基因的外显子、调控、转录区设计引物,引物扩增区域包含常见缺失位点和突变位点,并且包括新突变位点在内的500多个位点,远超现有检测方法所检测到突变数量;同时本发明克服了缺失型和突变型地贫的检测差异性,在同一PCR反应中同时扩增缺失型和突变型,不仅能检测已知的突变位点和热点位点,同时可发现新的突变位点,操作简单,降低试剂成本。
本发明涉及分子生物学技术领域,公开了一种突变型DNA聚合酶及其制备方法与应用,该突变型DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示,该氨基酸序列是在野生型FWT聚合酶的基础上突变得到,其突变位点包括:第80位的丙氨酸突变为精氨酸、第107位的天冬酰胺突变为天冬氨酸、第172位的谷氨酸突变为精氨酸、第325位的天冬酰胺突变为天冬氨酸、第423位的天冬氨酸突变为丙氨酸、第490位的丝氨酸突变为丙氨酸、第491位的苯丙氨酸突变为丙氨酸。该突变型DNA聚合酶在室温条件下具有相比于野生型更好的持续合成、链置换以及耐高盐能力,是滚环扩增和多重置换扩增的理想工具。
本发明公开了一种CRP突变型基因及其应用,属于基因工程技术领域。该CRP突变型基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9所示,其可以显著解除“葡萄糖抑制”效应,同时在以葡萄糖为碳源的基本培养基中,激活糖酵解和TCA循环,强化葡萄糖的利用和生物合成,促进菌株生长,其中氨基酸序列如SEQ ID NO.7、8、9所示的CRP突变型基因还具有提高菌株香草醛或柚皮素表达量的作用。
本发明提供了一种高效引入赖氨酸衍生物的突变型氨酰基‑tRNA合成酶,其具有SEQ ID NO.3所示氨基酸序列。相比野生型赖氨酰‑tRNA合成酶,本发明突变型赖氨酰‑tRNA合成酶活性高、可溶性好,可显著提高非天然氨基酸的插入量和含有非天然氨基酸的目的蛋白的表达量,可以降低不含非天然氨基酸的断链蛋白的表达量,易于分离纯化本发明还提供了包含该突变型赖氨酰‑tRNA合成酶的制剂和相关应用。