本发明公开了一种基于兔轮状病毒VP8*蛋白的间接ELISA抗体检测试剂盒,包括兔轮状病毒VP8*蛋白包被的ELISA板;所述兔轮状病毒VP8*蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。还包括样品稀释液,浓缩洗涤液,酶结合物工作液等。所述间接ELISA抗体检测试剂盒在检测兔轮状病毒抗体中的应用。本发明以兔轮状病毒VP8*蛋白为包被抗原,其对于RVs抗体的特异性高,安全性好,只与RVs阳性血清特异结合,不与兔其它病毒的阳性血清发生交叉反应,具有良好的抗原性。本发明的间接ELISA抗体检测试剂盒具有很高的特异性和敏感性,可实现对兔轮状病毒抗体的高通量检测,为兔轮状病毒的综合防控提供了技术支撑。