本发明公开了一种病毒载体的物理滴度检测试剂盒及检测方法,涉及生物检测技术领域。本发明提供的病毒载体的物理滴度检测试剂盒,采用两步法qPCR反应进行绝对定量病毒基因组拷贝数并间接计算病毒颗粒数,试剂盒中的引物对含有如SEQ ID No 8所示核苷酸序列的病毒载体具有良好的特异性,该试剂盒对含有该种病毒载体的细胞制剂等产品的病毒载体的物理滴度检测具有通用性本发明提供的病毒载体的物理滴度检测方法,为两步法,标准品为cDNA的形式,便于保存,且检测过程中去除了样品包装细胞中的基因组DNA,提高了检测结果的准确性。