本发明涉及一种大肠杆菌周质腔分泌型表达载体pFUW802s，该载体通过在外源蛋白的N端添加果胶酶(PelB)信号肽(SEQ ID NO：1)，并使外源蛋白与FK506结合蛋白类肽酰脯氨酸顺反异构酶(FkpA)共表达，提高外源蛋白在大肠杆菌周质腔中表达水平；一种周质腔分泌型表达抗癌胚抗原单链抗体(scFv)的载体pFUW802s/CEA－scFv；一种周质腔分泌型表达人次级淋巴组织趋化因子的载体pFUW802s/hSLC；以及一种含有上述周质腔分泌型表达载体的宿主细胞。
本发明涉及一种在大肠杆菌分泌型表达重组人粒细胞集落因子(rHG-CSF)，该载体通过在外源蛋白的N端添加DsbA信号肽(SEQ ID NO：1)，并使用λPL启动子，可构建一种周质腔分泌型表达重组蛋白的载体，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，通过温度诱导实现外源蛋白在大肠杆菌周质腔中表达。该方法表达量高、分泌效率高，适用于高效稳定地分泌表达多种外源基因。
本发明公开了一种表达和生产白喉毒素无毒突变蛋白的方法及其使用的特异DNA分子，白喉毒素无毒突变蛋白即CRM197蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的方法可以在周质中产生CRM197蛋白，与胞内产生CRM197蛋白相比，周质产生CRM197蛋白具有如下优势：切割信号肽后，蛋白以其成熟形式产生；大肠杆菌的周质是氧化环境，其允许形成二硫键，这可帮助产生可溶性、正确折叠的蛋白；周质含有较少的蛋白，可以获得更纯的CRM197蛋白。此外，本发明在周质中产生的CRM197蛋白比现有技术中在周质中产生的CRM197蛋白的表达量高，即获得了较高得率的CRM197蛋白。本发明具有重要的应用价值。
