本发明涉及一种新型CpG疫苗佐剂及其应用，其中，该免疫刺激性寡核苷酸中全部核苷酸均为硫代修饰；该寡核苷酸的核苷酸序列为以下SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明的寡核苷酸对小鼠脾细胞和人PBMC均显示出较好的免疫刺激作用，与铝佐剂联用在激发机体体液免疫和细胞免疫方面具有显著提高作用，且本发明的佐剂在疫苗的使用中不同剂量间效果差异不大，较低剂量即可取得较好的免疫效果。
本发明公开了新型三聚体重组蛋白疫苗。具体地公开了氨基酸序列是SEQ ID No.1的突变蛋白RBD8M及氨基酸序列是SEQ ID No.4的第26‑277位、第1‑277位和SEQ ID No.4的融合蛋白。本发明还公开了含有所述融合蛋白的疫苗，进一步开发了含有所述融合蛋白和双佐剂的三聚体重组蛋白疫苗。实验表明，本发明制备的疫苗在动物体内能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，微量蛋白即可激发小鼠非常高的免疫反应，有很好的保护效果，可同时产生针对多种流行株的新型冠状病毒的高滴度中和抗体，是一种广谱有效的新冠疫苗，对于预防新型冠状病毒感染具有重要的意义和广泛的临床应用前景。
本发明公开了预防新型冠状病毒感染的通用三聚体重组蛋白疫苗。具体地公开了氨基酸序列是SEQ ID No.1的突变蛋白RBD4M及氨基酸序列是SEQ ID No.4的第26‑277位、第1‑277位和SEQ ID No.4的融合蛋白。本发明还公开了含有所述融合蛋白的疫苗，进一步开发了含有所述融合蛋白和双佐剂的三聚体重组蛋白疫苗。实验表明，本发明制备的疫苗在动物体内能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，微量蛋白即可激发小鼠非常高的免疫反应，有很好的保护效果，可同时产生针对多种流行株的新型冠状病毒的高滴度中和抗体，是一种广谱有效的新冠疫苗，对于预防新型冠状病毒感染具有重要的意义和广泛的临床应用前景。
本发明公开了纳米颗粒通用新冠疫苗及其制备方法。本发明公开的纳米颗粒通用新冠疫苗，由序列表中SEQ ID No.7或SEQ ID No.10所示的蛋白质与铝佐剂、CpG佐剂混合得到。实验证明，本发明的纳米颗粒通用新冠疫苗免疫动物后血清中能够产生结合新型冠状病毒的抗体，本发明的疫苗针对不同新型冠状病毒变异株均能产生较好的交叉保护效果，并且在小鼠上抗原剂量只需要0.05μg即可。本发明的SEQ ID No.7或SEQ ID No.10所示的蛋白质及利用该蛋白质制备的疫苗具有很好的应用前景。
本发明公开了一种RSV纳米颗粒疫苗及其制备方法与应用。本发明通过将RSV的Pre‑F相关序列及铁蛋白纳米颗粒进行突变设计，并将Pre‑F突变蛋白和铁蛋白突变体在真核细胞中进行融合表达，得到具备多个Pre‑F在表面集中展示的铁蛋白‑PreF融合蛋白纳米颗粒，该铁蛋白‑PreF融合蛋白纳米颗粒的氨基酸序列为SEQ ID No.20‑27中任一种。通过实验表明：将本发明制备的铁蛋白‑PreF融合蛋白注射至小鼠，可以获取到高保护效价的血清，且小鼠血清针对真病毒可产生较高的中和效价，同时通过稳定性实验和安全性实验证明：本发明制备的铁蛋白‑PreF融合蛋白还具备足够的物理稳定性和较好的安全性。
本发明公开了一种表达和生产白喉毒素无毒突变蛋白的方法及其使用的特异DNA分子，白喉毒素无毒突变蛋白即CRM197蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的方法可以在周质中产生CRM197蛋白，与胞内产生CRM197蛋白相比，周质产生CRM197蛋白具有如下优势：切割信号肽后，蛋白以其成熟形式产生；大肠杆菌的周质是氧化环境，其允许形成二硫键，这可帮助产生可溶性、正确折叠的蛋白；周质含有较少的蛋白，可以获得更纯的CRM197蛋白。此外，本发明在周质中产生的CRM197蛋白比现有技术中在周质中产生的CRM197蛋白的表达量高，即获得了较高得率的CRM197蛋白。本发明具有重要的应用价值。
