[发明专利]一种高活性7位点突变的猪干扰素α突变体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201910779235.8 | 申请日： | 2019-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN110343164A | 公开（公告）日： | 2019-10-18 |
| 发明（设计）人： | 梁秀丽;魏法山;魏战勇;郑兰兰;王朋涛;夏璐;张福良;王雪平;龙福庆;贾雪娜 | 申请（专利权）人： | 安阳工学院 |
| 主分类号： | C07K14/56 | 分类号： | C07K14/56;C12N15/21;C12N15/70;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;A61K38/21;A61P31/00 |
| 代理公司： | 郑州优盾知识产权代理有限公司 41125 | 代理人： | 冉珊敏 |
| 地址： | 455000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明属于干扰素领域，特别是指一种高活性7位点突变的猪干扰素α突变体及其制备方法和应用。本发明对猪干扰素α基因进行改造以获得新的基因序列，通过改造提高其生物活性。运用重叠PCR的方法对天然猪干扰素α基因进行定点突变，将改造后的基因克隆到pET‑32a载体上构建重组质粒，将鉴定正确的重组质粒克隆到Rosetta表达菌中诱导表达和鉴定，重组蛋白以包涵体形式表达，蛋白分子质量约32KDa，经纯化和透析处理后，获得纯度较高的猪干扰素α突变体，用细胞病变抑制法测定抗病毒活性；结果表明试验所得的突变体蛋白的抗病毒活性为8.15×108U/mg，比体外表达的野生型干扰素活性提高了大约200倍。 | ||
| 搜索关键词： | 猪干扰素α 突变体 制备方法和应用 抗病毒活性 位点突变 高活性 细胞病变抑制法 干扰素 构建重组质粒 重组质粒克隆 改造 干扰素活性 突变体蛋白 蛋白分子 定点突变 基因克隆 基因序列 生物活性 体外表达 透析处理 形式表达 诱导表达 重组蛋白 重叠PCR 包涵体 野生型 基因 试验 | ||
【主权项】：
1.一种高活性7位点突变的猪干扰素α突变体，其特征在于：所述突变体蛋白与天然猪干扰素α蛋白相比氨基酸突变位点为S38→F38、H40→Q40、F43→L43、N78→D78、C86→Y86、V151→A151及T156→R156。
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- 周敏毅;刘金毅;程永庆 - 北京三元基因工程有限公司
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- 本发明属于生物医药领域，涉及复合干扰素半胱氨酸突变体、其聚乙二醇衍生物，后者的制备方法、药物组合物和两者在制备治疗病毒性疾病的药物中的用途。所述的复合干扰素半胱氨酸突变体是将复合干扰素氨基酸序列中从N端计的第57位的氨基酸突变为半胱氨酸；所述的复合干扰素半胱氨酸突变体的聚乙二醇衍生物是由所述的复合干扰素半胱氨酸突变体与聚乙二醇修饰剂连接得到，所述的聚乙二醇修饰剂的分子量在5KDa-40KDa之间。本发明的复合干扰素半胱氨酸突变体及其聚乙二醇衍生物有更高的生物学活性，更好的药理作用与稳定性，并具有更可靠的安全性。
- 干扰素α突变体及其聚乙二醇衍生物-201310069953.9
- 周敏毅;刘金毅;程永庆 - 北京三元基因工程有限公司
- 2012-02-23 - 2013-06-12 - C07K14/56
- 本发明属于生物医药领域，涉及复合干扰素半胱氨酸突变体、其聚乙二醇衍生物，后者的制备方法、药物组合物和两者在制备治疗病毒性疾病的药物中的用途。所述的复合干扰素半胱氨酸突变体是将复合干扰素氨基酸序列中从N端计的第77位的氨基酸突变为半胱氨酸；所述的复合干扰素半胱氨酸突变体的聚乙二醇衍生物是由所述的复合干扰素半胱氨酸突变体与聚乙二醇修饰剂连接得到，所述的聚乙二醇修饰剂的分子量在5KDa-40KDa之间。本发明的复合干扰素半胱氨酸突变体及其聚乙二醇衍生物有更高的生物学活性，更好的药理作用与稳定性，并具有更可靠的安全性。
- 干扰素α突变体及其聚乙二醇衍生物-201310069113.2
- 周敏毅;刘金毅;程永庆 - 北京三元基因工程有限公司
- 2012-02-23 - 2013-05-22 - C07K14/56
- 本发明属于生物医药领域，涉及复合干扰素半胱氨酸突变体、其聚乙二醇衍生物，后者的制备方法、药物组合物和两者在制备治疗病毒性疾病的药物中的用途。所述的复合干扰素半胱氨酸突变体是将复合干扰素氨基酸序列中从N端计的第75位的氨基酸突变为半胱氨酸；所述的复合干扰素半胱氨酸突变体的聚乙二醇衍生物是由所述的复合干扰素半胱氨酸突变体与聚乙二醇修饰剂连接得到，所述的聚乙二醇修饰剂的分子量在5KDa-40KDa之间。本发明的复合干扰素半胱氨酸突变体及其聚乙二醇衍生物有更高的生物学活性，更好的药理作用与稳定性，并具有更可靠的安全性。
- 一种重组猪干扰素α1及其编码基因和表达方法-201310025176.8
- 马永;王安良;章成昌;徐春林;陈晨;王耀方 - 江苏众红生物工程创药研究院有限公司;常州京森生物医药研究所有限公司
- 2013-01-23 - 2013-04-24 - C07K14/56
- 本发明提供了一种重组猪干扰素α1及其编码基因、表达、纯化和包涵体复性方法，属于生物基因工程领域。重组干扰素α1作为一种非特异性广谱抗病毒生物制剂在兽药领域具有广阔的药用前景，但与大多基因工程兽药一样其一直存在着生产量不足、价格昂贵、药品规格不一等问题。为获取大量的重组猪干扰素α1，本发明采用大肠杆菌表达系统对密码子优化后的重组猪干扰素α1基因进行异源表达。此外，针对原核表达体系中的猪干扰素α1多以包涵体的形式表达的问题，本发明还提供了重组干扰素α1包涵体纯化及复性方法，使得制得的重组干扰素α1具有较高活力，达到了产业化生产的标准。
- 经改良人类干扰素分子和其用途-201210496710.9
- 安娜-玛丽亚·A.·海斯·蒲楠;布鲁斯·E.·金梅尔;周何盛;信博诚;大卫·C.·利辛格;罗伯特·玛莉亚尼;瓦蒂·科瑞诺夫;尼克·科讷德森;汤马斯·O.·丹尼尔;艾伦·科德;史都华·布鲁塞尔;刘均阶;苗镇威;特瑞莎·毛洛 - AMBRX公司
- 2006-06-02 - 2013-04-10 - C07K14/56
- 本发明提供经改良人类干扰素多肽和其用途，所述人类干扰素多肽包括一个或一个以上非天然编码氨基酸，且具有至少一种经调节的生物活性。
- 专利分类
- 猪α-干扰素基因的全人工合成及水溶性表达
- 猪融合干扰素
- 一种由猪白细胞介素2、猪干扰素γ和猪干扰素α组成的融合蛋白及其制备方法
- 一种重组猪长效干扰素γ及制备此长效干扰素γ的融合蛋白及其制备方法
- 一种重组猪长效干扰素α及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法
- 一种重组猪长效干扰素α及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法
- 一种重组猪长效干扰素γ及制备此长效干扰素γ的融合蛋白及其制备方法
- 猪白蛋白-干扰素α-白介素2融合蛋白、制备方法及其编码基因、一种猪长效干扰素
- 一种由猪白细胞介素2、猪干扰素γ和猪干扰素α组成的融合蛋白及其制备方法
- 一种由猪白蛋白、猪干扰素γ和猪干扰素α组成的融合蛋白及其制备方法
