[发明专利]一种新型病原微生物检测的方法在审
| 申请号： | 201910756062.8 | 申请日： | 2019-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN110438199A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 覃俊杰 | 申请（专利权）人： | 深圳谱元科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06;C12Q1/04;C12Q1/70;G16B30/10;G16B50/30 |
| 代理公司： | 深圳市精英专利事务所 44242 | 代理人： | 李翔宇 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市福田区福保*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新型病原微生物检测的方法，包括：脑脊液、肺泡灌洗液类样本收集步骤；外周血样本采集步骤；DNA提取步骤，取400ul样本用于检测，样本中加入反应试剂buffer GB、Lysis Enzyme K、RNA Carrier，56℃下反应10min，获得反应液；反应液经硅胶膜吸附柱纯化，去除盐离子及有机试剂，得到总量、纯度符合要求的DNA；文库构建步骤，所述DNA由末端修复、接头连接、文库扩增富集、纯化、质控步骤处理，完成文库构建；测序步骤，文库经NaOH变性为单链后，结合到测序芯片上，经桥式扩增将每个单链DNA分子富集成为一个cluster，利用Illumina SBS测序方法读取序列，获得测序数据；分析步骤，所述测序数据经数据过滤、去除人源及接头序列，剩余数据与微生物参考数据库比对。 | ||
| 搜索关键词： | 病原微生物检测 测序数据 文库构建 测序 富集 扩增 去除 文库 样本 读取 单链DNA分子 参考数据库 肺泡灌洗液 外周血样本 测序芯片 反应试剂 分析步骤 接头连接 接头序列 末端修复 剩余数据 数据过滤 样本收集 有机试剂 硅胶膜 脑脊液 吸附柱 盐离子 变性 比对 单链 桥式 人源 质控 微生物 采集 检测 | ||
【主权项】：
1.一种新型病原微生物检测的方法，其特征在于，包括：脑脊液、肺泡灌洗液类样本收集步骤，使用2ml或5ml无菌冻存管收集样本，干冰保存，所述样本量大于1ml；外周血样本采集步骤，使用EDTA抗凝管或STRECK采血管收集外周血5ml，生物冰袋或4℃以下保存，8h内分离血浆，实施检测前进行血浆分离流程；DNA提取步骤，取400ul样本用于检测，样本中加入反应试剂buffer GB、Lysis Enzyme K、RNA Carrier，56℃下反应10min，获得反应液；反应液经硅胶膜吸附柱纯化，去除盐离子及有机试剂，得到总量、纯度符合要求的DNA；文库构建步骤，所述DNA由末端修复、接头连接、文库扩增富集、纯化、质控步骤处理，完成文库构建；测序步骤，文库经NaOH变性为单链后，结合到测序芯片上，经桥式扩增将每个单链DNA分子富集成为一个cluster，利用Illumina SBS测序方法读取序列，获得测序数据；分析步骤，所述测序数据经数据过滤、去除人源及接头序列，剩余数据与微生物参考数据库比对，鉴定出样本中的细菌、真菌、病毒、寄生虫微生物。
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