[发明专利]一种血清CTC中微小RNA的检测方法有效
| 申请号： | 201910698027.5 | 申请日： | 2019-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN110452955A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 梁晓飞;武田;宋娜 | 申请（专利权）人： | 昆山晟纳生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6804 | 分类号： | C12Q1/6804;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210000江苏省苏州市昆山市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种血清CTC中微小RNA的检测方法，通过在血液中捕获肿瘤释放的micro RNA携带的遗传信息并加以检测分析，实现利用无创的液体活检方式及时检测miRNA的qRT‑PCR方法。可以避免血清复杂成分干扰，从血清CTC中检测micro RNA效果更好，稳定性强，循环肿瘤细胞与组织相比，可以实现无创检测，而与血浆中游离的大分子相比，又具有无可比拟的稳定性，因此，具有很大的优势和潜力。 | ||
| 搜索关键词： | 血清 检测 循环肿瘤细胞 检测分析 稳定性强 无创检测 遗传信息 微小RNA 无创 血浆 捕获 游离 肿瘤 血液 释放 携带 | ||
【主权项】：
1.一种血清CTC中微小RNA的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：/n（1）：取来自非小细胞肺癌患者的外周血7.5 m L置于抗凝管中并混匀全血标本；/n（2）：去除血浆蛋白及血浆(清)核酸：将全血标本分为两等分加入缓冲液，离心去上清，轻摇离心管混匀沉淀细胞；/n（3）：去除红细胞：混匀后，于两管中分别加入裂解液，将离心管置于垂直混匀仪混匀，离心弃上清，轻摇离心管混匀沉淀细胞后补加缓冲液；/n（4）：分层离心：于两支新的离心管中加入分层液，将步骤（3）中的液体叠加到分层液顶层，然后用缓冲液清洗离心管管壁，将清洗液同时转移至缓冲液顶层离心；/n（5）：去除白细胞：步骤（4）中离心后可见3层溶液，轻柔吸取最上2层溶液于两支新的离心管内，分别加缓冲液，颠倒混匀后离心弃上清，加入缓冲液，混匀沉淀细胞；/n（6）：洗涤磁微粒：吸取适量磁微粒混悬液至EP管中，静置后吸弃溶液，加入缓冲液混匀，静置后弃上清，重复3次后用缓冲液重悬磁微粒至原体积；/n（7）：抗体孵育：将步骤（6）中磁微粒缓慢加入到处理好的血样本中，调节摇床摇速，并将离心管倾斜固定于摇床上，室温摇动；/n（8）：清除游离磁微粒：将两支离心管内的液体转移至两支新的离心管中，靠于磁力架上，随后将液体再次分别转移至两支新的离心管中，架于离心管上端，离心弃上清，然后分别涂至两张载玻片上；/n（9）：将步骤（8）中的载玻片自然晾干，用浓度为4%的多聚甲醛固定细胞表面抗原，浓度为1%的胎牛血清封闭细胞表面非特异性位点；/n（10）：将每份血样富集后获得的2张载玻片随机分为2组分别加一抗工作液，避光孵育后，充分洗涤；/n（11）：加二抗工作液，避光孵育后，充分洗涤，加DAPI工作液染色后，轻微洗涤；/n（12）：滴甘油，盖上盖玻片，由同一检验员显微镜下读片；/n（13）：采用实时荧光定量PCR检测CTC中微小RNA的表达量。/n
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