[发明专利]一种生物饲料发酵过程中乳酸菌菌群变化的检测方法

摘要

本发明公开了一种生物饲料发酵过程中乳酸菌菌群变化的检测方法，包括植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的菌群数量变化，为生物饲料发酵过程中厌氧益生菌菌量的测定提供了一种特异、敏感和成本较低的检测方法，能够实现五种厌氧益生菌同时检测并能了解五种厌氧益生菌在发酵过程中菌群的变化规律，为进一步优化发酵饲料提供技术方案。

主权项

1.一种生物饲料发酵过程中乳酸菌菌群变化的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：生物饲料中基因组DNA的提取：提取生物饲料中植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的基因组DNA；S2：特异性引物的设计：设计植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的特异性引物；S3：以步骤S1提取的DNA为模板，用步骤S2中设计的特异性引物作为扩增引物进行荧光定量PCR反应，反应结束后，计算所测样品中五种乳酸菌的数量；其中S2中设计的特异性引物为：植物乳杆菌：上游引物CAGCACTAGATACCGCCCTG，下游引物ATGTAGTGCCACGGTCGTTT，扩增长度211bp；嗜酸乳杆菌：上游引物AGACACGGCCCAAACTCC，下游引物GACAACGCTTGCCACCTA，扩增长度231bp；长双歧杆菌：上游引物GATTCTGGCTCAGGATGAACGC，下游引物CTGATAGGACGCGACCCCAT，扩增长度231bp；干酪乳杆菌：上游引物CTATAAGTAAGCTTTGATCCGGAGATT T，下游引物CTTCCTGCGGGTACTGAGATGT，扩增长度：133bp；鼠李糖乳杆菌：上游引物TGCTTGCATCTTGATTTAATTTTG，下游引物GTCCATTGTGGAAGATTCCC，扩增长度317bp。