[发明专利]一种双sgRNA位点敲除RSPH6A基因的CRISPR/Cas9系统与应用在审
| 申请号： | 201910242004.3 | 申请日： | 2019-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN109929845A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 赵恩峰;贺小宏;王延宾;任江涛;韩露 | 申请（专利权）人： | 南京北恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N9/22;C12N15/66;C12N5/10;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 卢倩 |
| 地址： | 210046 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于生物工程技术领域，特别涉及肿瘤发生、发展相关基因敲除方法，具体涉及一种双sgRNA位点敲除RSPH6A基因的CRISPR/Cas9系统与应用，本发明首次双位点敲除法，采用在同一外显子上设计两个sgRNA序列，针对该外显子上两个位点进行切割，可高效敲除RSPH6A基因，且只需PCR、电泳即可确定是否敲除成功，大大降低了敲除后鉴定成本，且敲除后只有一种突变型，大大增加了敲除结果的稳定性；将含有所述sgRNA的CRISPR/Cas9系统转染细胞，可获得敲除RSPH6A基因的细胞株。 | ||
| 搜索关键词： | 敲除 基因 外显子 位点 生物工程技术领域 电泳 鉴定成本 相关基因 肿瘤发生 转染细胞 突变型 细胞株 除法 个位 双位 切割 应用 成功 | ||
【主权项】：
1.一种敲除RSPH6A基因的sgRNA，其特征在于，包括RSPH6A sgRNA‑1和RSPH6A sgRNA‑2；所述RSPH6A sgRNA‑1的序列如下：RSPH6A sgRNA‑1：TCTTTCGGGCGTTCACGATC；RSPH6A sgRNA‑1 oligo1：5’‑caccgTCTTTCGGGCGTTCACGATC‑3’；RSPH6A sgRNA‑1 oligo2：5’‑aaacGATCGTGAACGCCCGAAAGAc‑3’；所述RSPH6A sgRNA‑2的序列如下：RSPH6A sgRNA‑2：GGCCCAGATAGCCCGCATCT；RSPH6A sgRNA‑2 oligo1：5’‑caccgGGCCCAGATAGCCCGCATCT‑3’；RSPH6A sgRNA‑2 oligo2：5’‑aaacAGATGCGGGCTATCTGGGCCc‑3’。
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