[发明专利]基于宫颈癌宿主细胞的甲基化检测方法在审
| 申请号： | 201711361831.1 | 申请日： | 2017-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN108103193A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 糜庆丰;夏渝东;张小安;崔世红;刘海量;吴春求;程国梅;任琛琛;黑娜;刘丽菲 | 申请（专利权）人： | 东莞博奥木华基因科技有限公司;郑州大学第三附属医院(河南省妇幼保健院) |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 523808 广东省东莞市松山湖高新技*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于宫颈癌宿主细胞的甲基化检测方法。在宫颈癌早筛中，宫颈脱落细胞采样量低时，提取的DNA量会出现低于100ng，甚至低于10ng的情况，达不到甲基化建库测序要求，使得难以快速再次获得的宫颈脱落细胞遭到浪费，且大大降低早筛效率。本发明方法能满足宫颈脱落细胞采样量低的要求，对DNA起始量为10ng的样本也可实现甲基化测序，并且检测准确率高，避免了低样本量的宫颈癌宿主细胞浪费。本发明方法在接头连接反应液、PCR扩增酶的优选、CT Conversion Reagent溶液处理时间上进行了创造性改进，实现了10ng灵敏度的微量甲基化建库测序。 | ||
| 搜索关键词： | 宫颈癌 宫颈脱落细胞 宿主细胞 甲基化检测 采样量 甲基化 测序 建库 甲基化测序 接头连接 溶液处理 灵敏度 起始量 样本量 准确率 优选 样本 检测 改进 | ||
【主权项】：
1.一种宫颈脱落细胞DNA的甲基化测序方法，包括如下步骤：(1)提取宫颈脱落细胞的基因组DNA；(2)将步骤(1)提取的DNA进行片段化、末端修复和3’端加A；(3)将步骤(2)的产物与甲基化接头、T4连接酶和连接反应液反应，获得加接头的DNA片段，进行纯化；(4)将步骤(3)的产物进行重亚硫酸盐处理并纯化，将DNA片段中未甲基化的C转化为U；(5)将步骤(4)的产物进行PCR扩增、纯化，获得测序文库；(6)将测序文库进行高通量测序，获得的测序数据进行生物信息学分析甲基化情况。
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