[发明专利]肿瘤特异性重组水蛭素及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 201710362103.6 | 申请日： | 2017-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN107216385A | 公开（公告）日： | 2017-09-29 |
| 发明（设计）人： | 何向锋;施文 | 申请（专利权）人： | 何向锋 |
| 主分类号： | C07K14/815 | 分类号： | C07K14/815;C12N5/10;A61K38/58;A61P7/02;A61P35/00;A23L33/17 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙)11400 | 代理人： | 高之波,倪金磊 |
| 地址： | 226000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种肿瘤特异性重组水蛭素，重组水蛭素的N末端含有可被肿瘤组织高表达的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)识别并裂解的寡肽序列Pro‑Gly‑Arg‑Val‑Val，用于重组的水蛭素为水蛭素异构体、水蛭素突变体、水蛭素嵌合体、截短的水蛭肽、基因修饰的水蛭素或水蛭素融合蛋白。相应地，本发明还提供了肿瘤特异性重组水蛭素的制备方法及其在制备防治肿瘤的药物中的应用，还提供了表达肿瘤特异性重组水蛭素的过继免疫细胞的制备方法和用途。本发明的重组水蛭素，使水蛭素抗凝活性进行肿瘤靶向性释放，营造不易形成血栓的微环境，甚至溶解已形成的微小栓子以达到抗凝、溶栓、防止肿瘤细胞转移的功能，这就克服了野生型水蛭素全身用药引起系统性出血的风险。 | ||
| 搜索关键词： | 肿瘤 特异性 重组 水蛭 及其 制备 方法 用途 | ||
【主权项】：
肿瘤特异性重组水蛭素，其特征在于，所述重组水蛭素的N末端含有可被uPA识别并裂解的寡肽序列，uPA为肿瘤组织高表达的尿激酶型纤溶酶原激活物，用于重组的水蛭素为水蛭素异构体、水蛭素突变体、水蛭素嵌合体、截短的水蛭肽、基因修饰的水蛭素或水蛭素融合蛋白。
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- 谢海林 - 广西复鑫益生物科技有限公司平南分公司
- 2015-06-19 - 2015-09-23 - C07K14/815
- 本发明公开一种从水蛭唾液中提取水蛭素的方法，包括以下步骤：A、将水蛭置于容器中充分饥饿，投入诱导物质至水蛭吸饱后，加入催吐剂使其吐出体内的唾液，然后取出吸血水蛭活体返回饲养池继续饲养，同时收集容器内的水蛭素粗品液体；B、解冻上述水蛭素粗品，加进预冷的冷丙酮中，搅拌后置冰箱中沉淀过夜，次日吸出上清丙酮并离心，加入三氯乙酸溶解，离心除去残渣，得浓缩液；C、用阴离子交换柱层析法对上述浓缩液进行洗脱后，进行凝胶过滤柱层析，即得。本发明提供一种具有工艺合理、操作方便实用、水蛭素成品的质量稳定性好和收率较高的特点，且能够避免传统方法对水蛭的一次性掠夺，保护了水蛭的野生资源，又带动了水蛭养殖业的发展。
- 一种提高水蛭素提取收率的方法-201510345287.6
- 谢海林 - 广西复鑫益生物科技有限公司平南分公司
- 2015-06-23 - 2015-09-09 - C07K14/815
- 本发明公开一种提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步骤：在捕捞前的12～54小时，补喂一次饲料；或在正常饲喂饲料12～54小时后进行捕捞；在室温下先将活体水蛭提取至贮藏槽，用去离子水漂洗，滤出水分，浸入生理盐水漂洗，添加电解质液层覆盖，通入直流电进行刺激，收集水蛭分泌的液体，后将活体水蛭从滤槽中放回饲养槽；将收集的分泌物经过800μm纳滤膜后续处理除去部分的水份，添加稳定剂，进行喷雾干燥，获得高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。本发明通过调整水蛭的摄食时间，用以改善水蛭体内水蛭素含量，并用电刺激活体水蛭提取水蛭素的方法，简化水蛭素的生产工艺，同时保持水蛭的活体，多次提取高纯度水蛭素。
- 一种基于膜从水蛭中提取水蛭素的方法-201510188569.X
- 虞龙;吴奎;虞沐尧 - 虞龙
- 2015-04-21 - 2015-07-15 - C07K14/815
- 本发明公开了一种基于膜从水蛭中提取水蛭素的方法，将水蛭至于猪血中，待其吸血完毕后，将水蛭捣碎成水蛭浆；然后水蛭浆进行超声处理，得到小分子混合液；依次通过陶瓷膜，微滤膜除去大分子蛋白，再通过超滤膜浓缩；得到的超滤浓缩液通过阴离子交换树脂洗脱、收集有抗凝血活性洗脱液；得到的活性成分再次经超滤膜浓缩，浓缩液经冷冻干燥得到水蛭素干粉。本工艺能够简单快速的从水蛭中提取水蛭素，各步骤连续，成本低廉，操作简单，且适合大规模生产，得到的水蛭素干粉质量稳定性高。
- 一种水蛭素提取分离的工艺-201510131284.2
- 虞龙;张旭琛;许友鹏 - 靖江至高生物科技有限公司
- 2015-03-24 - 2015-07-08 - C07K14/815
- 本发明公开了一种水蛭素提取分离的工艺，将水蛭打碎匀浆之后的提取液经过陶瓷滤膜过滤，用蒸馏水进行陶瓷滤膜清洗；合并陶瓷滤膜过滤液和清洗液，经有机滤膜过滤，用蒸馏水进行有机滤膜清洗；将得到的有机滤膜过滤液和清洗液通过凝胶色谱柱洗脱，再通过高压液相层析仪检测洗脱液；将水蛭素色谱纯度达到80％以上的流分进行收集，将收集到的洗脱液再经纳滤膜浓缩，将浓缩液经过反相c18半制备柱进行纯化，收集目标峰值；进行冷冻干燥，得到冻干水蛭素纯品。本发明采用陶瓷滤膜和有机膜进行结合过滤分离的方式，水蛭匀浆液中的大部分杂质可以得到去除，提高了提取的效率，而且操作方便，避免了有机溶剂的使用，提取制备成本大大降低。
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