[发明专利]海洋微生物脂肪酶YS2071的固定化方法在审
| 申请号： | 201710228123.4 | 申请日： | 2017-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN108690842A | 公开（公告）日： | 2018-10-23 |
| 发明（设计）人： | 王跃军;孙晶晶;刘均忠;郝建华;马子宾;孙谧 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | C12N11/08 | 分类号： | C12N11/08;C12N9/20 |
| 代理公司： | 北京方安思达知识产权代理有限公司 11472 | 代理人： | 陈琳琳;武玥 |
| 地址： | 266071 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及海洋微生物低温脂肪酶YS2071的固定化方法,包括脂肪酶YS2071溶液的配制、固定化载体环氧树脂的处理以及固定化,得到固定化脂肪酶YS2071。该固定化方法操作简单，条件温和,固定化脂肪酶YS2071兼备吸附和共价连接的独特特点和优异特性,并具有高效、稳定、酶活率保留高的固定化方法。固定化脂肪酶YS2071是一种重要的生物催化剂，它在能源领域，食品工业、洗涤剂、油脂工业、医药工业等领域都有重要的应用。 | ||
| 搜索关键词： | 固定化 固定化脂肪酶 脂肪酶 海洋微生物 环氧树脂 低温脂肪酶 固定化载体 生物催化剂 独特特点 共价连接 能源领域 油脂工业 洗涤剂 医药工业 酶活 吸附 配制 保留 应用 | ||
【主权项】：
1.一种海洋微生物脂肪酶YS2071的固定化方法,包括下列步骤：1)、配制海洋微生物低温脂肪酶YS2071酶液将海洋微生物低温脂肪酶YS2071酶粉，溶于0.02mol/L由磷酸氢二钾4.76g，磷酸二氢钾0.55g，加入去离子水溶解，定容到1L配制的缓冲液中，4℃下搅拌均匀后，8000r/min高速离心5min，将上清转移到容量瓶中，用上述缓冲液定溶后，得到海洋微生物脂肪酶YS2071酶液，其中,脂肪酶的活性为486U/g，脂肪酶的浓度为2mg/mL，4℃；2)、固定化载体环氧树脂的处理取固定化载体环氧树脂先用95wt％的乙醇浸泡24h后抽滤,用去离子水洗净乙醇，再用丙酮浸泡12h后，用去离子水洗净至中性；3)、脂肪酶YS2071的固定化将步骤2处理的固定化载体环氧树脂与步骤1海洋微生物低温脂肪酶YS2071的酶液混合，其中，脂肪酶的活性为486U/g,脂肪酶的浓度为2mg/mL，脂肪酶的加酶量为8mg/g，25℃，180rpm作用12h，抽滤，并用0.1M pH 8.0由磷酸氢二钾23.8g，磷酸二氢钾2.75g，加入去离子水溶解，定容到1L的磷酸盐缓冲液洗三次，去除多余的脂肪酶溶液，冷冻干燥得到环氧树脂载体固定化海洋微生物低温脂肪酶YS2071。
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- 一种以聚氨基酸修饰的聚苯乙烯树脂为载体的固定化酶，包括酶和固定所述酶的载体；其中，所述的酶为β‑葡萄糖苷酶；所述的载体为聚氨基酸修饰的氨甲基聚苯乙烯树脂颗粒，所述的聚氨基酸，其氨基酸序列为：Arg‑Asp‑Glu‑Glu‑Lys‑Lys‑Asp‑Asp‑Asp‑Asp，氨基酸序列中的羧基端氨基酸Asp与树脂上的氨甲基脱水缩合形成肽键相连。本发明采用上述聚氨基酸修饰的聚苯乙烯树脂为载体固定化β‐葡萄糖苷酶，由于载体表面的电荷环境与β‐葡萄糖苷酶的最适pH值(约为4.5左右)相近，其表面的扩散双电层对酶分子结构具有保护作用，显著提高了固定化酶的操作稳定性。
- 一种固定化头孢菌素C酰化酶及其制备方法-201510167678.3
- 胡又佳;张伟;徐雪丽;谢丽萍;刘艳;龚桂花;刘海元 - 中国医药工业研究总院;上海欣生源药业有限公司
- 2015-04-09 - 2019-02-19 - C12N11/08
- 本发明公开了一种固定化头孢菌素C酰化酶及其制备方法。所述固定化头孢菌素C酰化酶包括ES‑1树脂和固定于ES‑1树脂上的头孢菌素C酰化酶。所述制备方法包括下述步骤：将ES‑1树脂和头孢菌素C酰化酶溶于0.5‑1.0mol/L，pH 7.0‑10.5的磷酸盐缓冲液中，15‑35℃固定化8‑20h。本发明提供了一种与现有技术相比固定化时间短、酶活回收率高的固定化头孢菌素C酰化酶的方法，解决了现有技术高生产成本的问题，更适用于工业生产。
- 真菌疏水蛋白HGFI在胰蛋白酶固定化中的应用-201610323576.0
- 李文凤;牛宝龙;李炳章;王慧芳;郭睿劼;马森源;魏丽乔 - 太原理工大学
- 2016-05-10 - 2019-02-15 - C12N11/08
- 本发明涉及真菌疏水蛋白HGFI在胰蛋白酶固定化中的应用，其首次利用真菌疏水蛋白中的特定蛋白实现对胰蛋白酶的固定，其中，充分利用了疏水蛋白HGFI高效的自组装成膜和固定化能力，并通过静态吸附的方法利用真菌疏水蛋白HGFI对聚苯乙烯材料表面进行修饰，并进一步通过静电作用力将胰蛋白酶固定到HGFI修饰的聚苯乙烯表面，利用HGFI的生物源性和高表面活性改善聚苯乙烯的疏水性和生物相容性，最终改善了胰蛋白酶在疏水载体表面的催化活性，延长了胰蛋白酶的使用寿命，增加了胰蛋白酶的使用次数。提高了胰蛋白酶在科研和工业中的应用。
- 以植物纤维为支撑体的包埋微生物载体及其制备方法-201711424229.8
- 刘希强;任彦强;刘金泉;邢成良;牛志华;刘晓琳 - 桑德生态科技有限公司;桑德集团有限公司
- 2017-12-25 - 2019-02-12 - C12N11/08
- 本发明公开了一种以植物纤维为支撑体的包埋微生物载体，该包埋微生物载体是以麻绳为支撑体，经包埋微生物载体混合液浸泡挂膜后，经交联溶液雾化处理后经凝胶固化和密闭熟化制成的包埋微生物载体。该方法包括：步骤1，制备支撑体麻绳；步骤2，配置包埋微生物载体混合液和交联溶液：步骤3，支撑体麻绳挂膜和交联雾化处理。该包埋微生物载由于使用天然植物纤维材料制备支撑体，极大增加了载体物理强度和使用寿命；而且既增加了包埋微生物的表面积，又降低了包埋材料的使用量，降低了材料成本；也可实现包埋载体微生物的固定式管理，降低了设备投资费用，简化了管理程序；简化了载体填料加工过程，更利于自动化连续生产。
- 一种多孔固定化酵母及其制备方法与应用-201610281572.0
- 高俊永;尚红岩;黄向阳;许广球;郭艺山;高亚飞;徐日益;苏江滨;杨雕;陈秀萍;陆浩湉 - 广东省生物工程研究所（广州甘蔗糖业研究所）
- 2016-04-28 - 2019-01-18 - C12N11/08
- 本发明属于生物发酵技术领域，公开了一种多孔固定化酵母及其制备方法与应用。所述制备方法为：将PVA于80～100℃溶解于水中得到PVA溶液，然后将PVA溶液冷却至35℃以下，再加入复合酵母液搅拌混合均匀，得到酵母混合液；然后将酵母混合液在0～30℃进行空化制泡、倒入模具中冷冻成型，得到所述多孔固定化酵母。本发明采用海藻糖和稀释糖蜜做酵母保护剂，并添加细胞宿主载体和采用空化制泡技术，可显著提高冷冻后酵母的解冻活性和发酵效率。
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