[发明专利]一种检测人BRAF基因突变的探针法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测人BRAF基因突变的探针法及检测试剂盒。该方法包括以下步骤：(1)在BRAF V600E PCR反应混合液中加入人类基因组DNA，形成BRAF V600E反应体系并进行荧光定量PCR扩增，其中BRAF V600E PCR反应混合液中包括溶解在PCR预混液中的：BRAF V600E上游引物、BRAF V600E下游引物、BRAF V600E探针、内参上游引物、内参下游引物和内参探针；(2)结果判断：根据PCR扩增的突变Ct值进行分析。该试剂盒包括：BRAF V600E PCR反应混合液。该探针法和试剂盒为临床上提供了一种速度快、灵敏度高、特异性强的BRAF基因突变检测体系。

主权项

1.一种检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，包括BRAF V600E PCR反应混合液，其中所述BRAF V600E PCR反应混合液中包括溶解在PCR预混液中的以下组分：如序列表中SEQ ID No.1所示序列的BRAF V600E上游引物、如序列表中SEQ ID No.2所示序列的BRAF V600E下游引物、如序列表中SEQ ID No.3所示序列的BRAF V600E探针、如序列表中SEQ ID No.4所示序列的内参上游引物、如序列表中SEQ ID No.5所示序列的内参下游引物和如序列表中SEQ ID No.6所示序列的内参探针；其中，所述BRAF V600E上游引物序列为SEQ ID No.1：gtaaaaataggtgattttggtctagctacagA，其中gtaaaaataggtgattttggtctagctacagA中大写的A为腺嘌呤对应的LNA核苷酸；所述BRAF V600E下游引物序列为SEQ ID No.2：GTTGAGACCTTCAATGACTTTCTAG，其中大写的A、T、C、G分别为腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤对应的LNA核苷酸；所述BRAF V600E探针序列SEQ ID No.3：aacTcaGcaGcaTctcagg，其中大写的T和G分别为胸腺嘧啶、鸟嘌呤对应的LNA核苷酸；BRAF V600E探针序列5’端连接有荧光报告基团FAM，BRAF V600E探针序列3’端连接有淬灭基团BHQ1；所述内参探针序列5’端连接有荧光报告基团ROX，内参探针序列3’端连接有淬灭基团BHQ2。