[发明专利]一种检测人BRAF基因突变的探针法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，包括BRAF V600E PCR反应混合液，其中所述BRAF V600E PCR反应混合液中包括溶解在PCR预混液中的以下组分：如序列表中SEQ ID No.1所示序列的BRAF V600E上游引物、如序列表中SEQ ID No.2所示序列的BRAFV600E下游引物、如序列表中SEQ ID No.3所示序列的BRAF V600E探针、如序列表中SEQ IDNo.4所示序列的内参上游引物、如序列表中SEQ ID No.5所示序列的内参下游引物和如序列表中SEQ ID No.6所示序列的内参探针；

其中，所述BRAF V600E上游引物序列为SEQ ID No.1：gtaaaaataggtgattttggtctagctacagA，其中gtaaaaataggtgattttggtctagctacagA中大写的A为腺嘌呤对应的LNA核苷酸；所述BRAF V600E下游引物序列为SEQ ID No.2：GTTGAGACCTTCAATGACTTTCTAG，其中大写的A、T、C、G分别为腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤对应的LNA核苷酸；所述BRAF V600E探针序列SEQ ID No.3：aacTcaGcaGcaTctcagg，其中大写的T和G分别为胸腺嘧啶、鸟嘌呤对应的LNA核苷酸；BRAF V600E探针序列5’端连接有荧光报告基团FAM，BRAF V600E探针序列3’端连接有淬灭基团BHQ1；所述内参探针序列5’端连接有荧光报告基团ROX，内参探针序列3’端连接有淬灭基团BHQ2。

2.根据权利要求1所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述BRAF V600EPCR反应混合液中各组分在PCR预混液中的浓度为：所述BRAF V600E上游引物的浓度为2-4μM；所述BRAF V600E下游引物的浓度为2-4μM；所述BRAF V600E探针的浓度为2-4μM；所述内参上游引物的浓度为1-3μM；所述内参下游引物的浓度为1-3μM；所述内参探针的浓度为1-3μM。

3.根据权利要求2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述BRAF V600E上游引物的浓度为3μM。

4.根据权利要求2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述BRAF V600E下游引物的浓度为3μM。

5.根据权利要求2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述BRAF V600E探针的浓度为3μM。

6.根据权利要求2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述内参上游引物的浓度为2μM。

7.根据权利要求2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述内参下游引物的浓度为2μM。

8.根据权利要求2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述内参探针的浓度为2μM。

9.根据权利要求1或2所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述BRAFV600E PCR反应混合液的PCR预混液中还溶解有dUTP和尿嘧啶DNA糖基化酶；所述dUTP在PCR预混液中的浓度为0.05-0.8μM，所述尿嘧啶DNA糖基化酶在PCR预混液中的浓度为0.005-0.02U/μl。

10.根据权利要求9所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述dUTP在PCR预混液中的浓度为0.2μM。

11.根据权利要求9所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述尿嘧啶DNA糖基化酶在PCR预混液中的浓度为0.01U/μl。

12.根据权利要求1所述的检测人BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，还包括弱阳性对照液和/或空白对照液。