[发明专利]一种生产水解淀粉生成果葡糖浆的酶系的方法

摘要

本发明公开了一种生产水解淀粉生成果葡糖浆的酶系的方法。属生物技术领域。首先分别克隆假单胞杆菌的异淀粉酶基因、曲霉的葡萄糖淀粉酶基因和栖热菌木糖异构酶基因；构建含上述三种基因表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母将表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体，并将载体转化相应的宿主菌而获得工程菌。发酵毕赤酵母工程菌、酿酒酵母工程菌和枯草芽孢杆菌工程菌生产重组混合异淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和木糖异构酶(水解淀粉生成果葡糖浆的酶系)。本发明用一道工序同时生产水解淀粉生成果葡糖浆的酶系，解决分别生产这三种酶的成本高而制约酶法生产果葡糖浆产业发展的问题，为市场提供上述酶系新产品，有利于加速酶法生产果葡糖浆产业的发展。

主权项

一种生产水解淀粉生成果葡糖浆的酶系的方法，其特征在于，其具体步骤如下：1)、应用分子生物学技术克隆假单胞杆菌的异淀粉酶基因、曲霉的葡萄糖淀粉酶基因和栖热菌的木糖异构酶基因；2)、分别构建含上述基因的表达框架的毕赤酵母表达载体、酿酒酵母表达载体和枯草芽孢杆菌表达载体；3)、将上述构建的毕赤酵母表达载体转化毕赤酵母获得毕赤酵母重组子，将上述构建的酿酒酵母表达载体转化酿酒酵母获得酿酒酵母重组子，将上述构建的枯草芽孢杆菌表达载体转化枯草芽孢杆菌获得枯草芽孢杆菌重组子；4)、筛选高表达以上所述的异淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和木糖异构酶的毕赤酵母重组子作为含假单胞杆菌的异淀粉酶基因表达框架、曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和栖热菌的木糖异构酶基因表达框架的毕赤酵母工程菌，筛选高表达以上所述的异淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和木糖异构酶的酿酒酵母重组子作为含假单胞杆菌的异淀粉酶基因表达框架、曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和栖热菌的木糖异构酶基因表达框架的酿酒酵母工程，筛选高表达以上所述的异淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和木糖异构酶的枯草芽孢杆菌重组子作为含假单胞杆菌的异淀粉酶基因表达框架、曲霉的葡萄糖淀粉酶基因表达框架和栖热菌的木糖异构酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌工程；5)、分别发酵以上所述的毕赤酵母工程菌、酿酒酵母工程菌和枯草芽孢杆菌工程菌生产水解淀粉生成果葡糖浆的酶系(异淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和木糖异构酶)。