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[发明专利]利用枯草芽孢杆菌发酵制备普鲁兰酶的方法-CN202310442999.4在审
发明人：张立;张成杰;吴菡;张茜茜;詹羿扬;王启军;辜玲芳;王晓亮;张庆丽;袁志超 -专利权人：武汉新华扬生物股份有限公司
申请日： 2023-04-24 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明提供一种利用枯草芽孢杆菌发酵制备普鲁兰酶的方法，该制备方法依靠菌种活化工艺、初级发酵工艺、补料发酵工艺至特定pH环境结束，可以获得的酶活达550U/mL以上的含普鲁兰酶发酵液。本发明方法在发酵过程通过严格控制pH变化区间，来确认放罐终点，整体上既保证普鲁兰酶的高酶活，同时也为生产提供一种更有时效性的终点判别方法。
利用枯草芽孢杆菌发酵制备普鲁兰酶方法

[发明专利]一种超嗜热II型普鲁兰酶及应用-CN202111483679.0有效
发明人：周哲敏;周丽;谢婷;韩来闯;崔文璟;刘中美;程中一;郭军玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-12-07 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种超嗜热II型普鲁兰酶及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对超嗜热II型普鲁兰酶进行氨基酸突变，获得了超嗜热II型普鲁兰酶突变体Q13H、I25E和Q13H/I25E。本发明获得的突变体催化性能有了很大的提高，且突变体在反应过程中不需要其他金属离子辅助(例如Ca2+)，有助于降低产物提取成本。本发明构建的突变体具有极强的热稳定性，在100℃保温10h还剩余50％的酶活，并具有较为广泛的pH活性范围和pH耐受性，在pH 5.8‑7.0范围保有70％活性，于不同的pH下，4℃放置剩余酶活均在75％以上，能很好的应用于淀粉工业中的糖化过程中。
一种超嗜热 ii 型普鲁兰酶应用

[发明专利]一种具有高分泌能力的普鲁兰酶突变体及其应用-CN201910650235.8有效
发明人：段绪果;朱秋雨;张心怡;沈镇炎;金璐;栾舒越;史洁莹;刘龙 -专利权人：南京林业大学
申请日： 2019-07-18 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有高分泌能力的普鲁兰酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明普鲁兰酶突变体胞外分泌能力较野生型有了明显的提高，将携带编码本发明普鲁兰酶突变体PulBd‑306的基因的大肠杆菌摇瓶诱导发酵44h，即可使发酵液上清液中的胞外酶活达38.9U·mL‑1，是野生型的2.3倍；将携带编码本发明普鲁兰酶突变体PulBd‑117的基因的大肠杆菌摇瓶诱导发酵44h，即可使发酵液上清液中的胞外酶活达49.6U·mL‑1，是野生型的2.9倍。
一种具有分泌能力普鲁兰酶突变体及其应用

[发明专利]一种采用酶制剂制备黑麦酒的方法及黑麦酒复合酶-CN202310175893.2在审
发明人：王建国;岳军胜;关志洁;王胜伟;王胜雷;王士栋;王玉民;孙素丽;袁安民;贺文中 -专利权人：山东一品农夫农业科技有限公司
申请日： 2023-02-28 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明提供了一种采用酶制剂制备黑麦酒的方法及黑麦酒复合酶。该黑麦酒复合酶由普鲁兰酶1份～3份、木聚糖酶2.5份～5份、β‑葡萄糖苷酶1份～5份、中性蛋白酶0.1～0.5份和脂肪酶0.05～0.15份组成。普鲁兰酶、木聚糖酶和中性蛋白酶复配，降低糖化液的粘度，促进酵母生长繁殖，提高酵母菌数量，缩短发酵时间，提高淀粉利用率；脂肪酶有助于催化水解发酵过程中产生的酯类化合物，生成酸类和醇类等物质，使酒质协调、促进酒体的芳香味和醇厚感。黑麦酒制备方法中使用适量的α‑淀粉酶和糖化酶进行糊化、糖化，添加酶制剂辅助发酵，减少了生产中酒曲的用量，提高了发酵酒精度，并产生更加丰富的风味物质，提高了黑麦白酒质量。
一种采用酶制剂制备麦酒方法复合

[发明专利]一种稳定性提高的普鲁兰酶突变体及其构建方法-CN202210987248.6在审
发明人：张显;饶志明;王志;胡孟凯;徐美娟 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-08-17 - 公布日： 2023-03-31 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种稳定性提高的普鲁兰酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明在高酶活长野芽胞杆菌来源普鲁兰酶的基础上，筛选获得两株单点热稳定性提高的突变菌株D147F，G690M以及一株组合突变体D147F/G690M。且突变体在热稳定显著提高的同时，酶的活性不受影响。本发明中的这些突变体比天然普鲁兰酶更适用于工业生产，具有非常巨大的应用前景和产业价值。
一种稳定性提高普鲁兰酶突变体及其构建方法

[发明专利]一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用-CN202210355246.5有效
发明人：曾静;何础阔;袁林;郭建军;侯安伟;聂俊辉 -专利权人：江西省科学院微生物研究所（江西省流域生态研究所）
申请日： 2022-04-06 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用，属于基因工程和酶工程领域。对嗜热酸性III型普鲁兰水解酶TK‑PUL中进化偶联氨基酸残基对K526/L538进行饱和突变，构建相应的饱和突变体文库，通过比较各突变体对可溶性淀粉的酶活力，筛选出针对可溶性淀粉的比酶活力显著提高的III型普鲁兰水解酶突变体Mut(K526N/L538E)。本发明提供的III型普鲁兰水解酶突变体Mut对可溶性淀粉的酶活力由对照(突变前)的54.08U/mg提高到190.47U/mg，提高了2.52倍，更适用于淀粉酶法制糖工业，有利于简化工艺、节约能源。
一种淀粉降解能力提高酸性 iii 型普鲁兰水解突变体及其制备方法应用

[发明专利]一种提高普鲁兰酶终浓度的发酵液处理方法-CN201911147726.7有效
发明人：祝冬君;德青美朵;王施岚;孙娟娟;沈微;陈献忠;杨海泉;夏媛媛 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-11-21 - 公布日： 2023-03-24 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：一种提高普鲁兰酶终浓度的发酵液处理方法，属于酶工程和发酵工程技术领域。本发明将处理溶液C与普鲁兰酶发酵上清液混合后保温，超滤浓缩，即得高酶活的普鲁兰酶发酵液。采用本发明方法，在以重组菌解淀粉芽孢杆菌BF7658/pUC980‑BdP发酵制备普鲁兰酶的后提取阶段，可以改善普鲁兰酶发酵液的超滤性能。经本发明处理的发酵液上清液经超滤浓缩后得到的浓缩液的酶活是未经溶液C处理的发酵液经同样超滤浓缩后得到的浓缩液的酶活的1.75倍以上。
一种提高普鲁兰酶终浓度发酵处理方法

[发明专利]一种可降低高级醇含量的复合酶制剂及其应用-CN202211210836.5在审
发明人：伍彦华;朱宝生;邱杰;梁艳玲;蓝彩红;韦丽婷;李逸钊;李振玉;陈麒;程劲芝;赖开平;林一雄 -专利权人：广西轻工业科学技术研究院有限公司
申请日： 2022-09-30 - 公布日： 2022-12-27 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种可降低高级醇含量的复合酶制剂及其应用，酶制剂的成分含量按每kg原料计为：β‑葡聚糖酶15000‑45000u、普鲁兰酶600‑1800u、Ca2+ 0.04‑0.11g、Zn2+ 0.007‑0.010g和PO43‑ 1‑5g。本发明在酿造过程中加入复合酶制剂，通过复合酶制剂的作用，可高效降低高级醇含量；本发明降低高级醇能力显著，可大幅降低酶制剂的使用量。复合酶制剂可在不改变酒类传统的生产工艺及特有的风味物质的前提下实施，添加方式多样，操作简单易行，不依赖于其他生产设备，最终制得米香型白酒口感醇和、顺口、协调，饮用舒适度提高，可应用于米香型白酒等酒类的工业化生产。
一种降低高级含量复合酶制剂及其应用

[发明专利]一种提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法-CN202010380799.7有效
发明人：祝冬君;王施岚;德青美朵;杨梦莲;沈微;陈献忠;杨海泉;夏媛媛 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-05-08 - 公布日： 2022-12-02 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：一种提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，属于微生物和酶工程技术领域。本发明采用两种特殊试剂对巴斯德毕赤酵母突变株处理，首先将重组巴斯德毕赤酵母突变体GS115/pPICK‑BdP5 WB138与10×试剂D反应，随后在冰水中放置，再加入10×试剂E反应。离心收集细胞后用柠檬酸缓冲液悬浮细胞进行超声波破碎。经过两种试剂处理的细胞经超声波处理6 min就将细胞全部破碎，破碎液中酶活保留在85%以上。使用本发明所提供的方法及专用处理液可以大幅度减少细胞破碎所需要消耗的电力等成本，减少设备占用时间。
一种提高胞内普鲁兰酶提取效率方法

[发明专利]一种耐热型中性普鲁兰酶的突变体及其应用-CN202110527128.3有效
发明人：聂尧;穆晓清;毕家华 -专利权人：宿迁市江南大学产业技术研究院
申请日： 2021-05-14 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种耐热型中性普鲁兰酶的突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明分别通过对普鲁兰酶的第73位、第135/314位、第135/314/126位和第135/314/126/72位的氨基酸进行突变，得到了4个热稳定性提高、催化效率不变或提高的普鲁兰酶突变体。在70℃下，其半衰期分别是野生型的2.6、1.9、3.3及3.1倍；Tm值分别提高了7.0、6.5、6.7、6.9℃。通过在耐高温中性普鲁兰酶突变体的N末端融合OptPelB使普鲁兰酶的胞外酶活达到9.7U·/mL，是野生型的的4.9倍。本发明中能够分泌表达的耐热中性普鲁兰酶突变体具有淀粉原料高值化利用的应用潜力。
一种耐热中性普鲁兰酶突变体及其应用

[发明专利]一种淀粉普鲁兰酶突变体及其应用-CN202110205369.6有效
发明人：李丹;李晓磊;付雪侠;慕思雨 -专利权人：长春大学
申请日： 2021-02-24 - 公布日： 2022-11-18 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开一种淀粉普鲁兰酶突变体及其应用，其获得的方法是以来源于古细菌Staphylothermus marinus F1的淀粉普鲁兰酶SmApu亲本酶，将位于第395位的苯丙氨酸或者位于第510位的苯丙氨酸进行突变得到的淀粉普鲁兰酶突变体。本发明的淀粉普鲁兰酶突变体具有水解支链淀粉中的α‑1，6‑糖苷键的活性的同时，完全丧失了水解环糊精活性，在淀粉、环糊精葡萄糖基转移酶的高温反应体系中，加入本发明的淀粉普鲁兰酶突变体，可以使环糊精的总产率提高43％以上。
一种淀粉普鲁兰酶突变体及其应用

[发明专利]一种普鲁兰酶-CN202210345524.9在审
发明人：王正祥;牛丹丹;田康明 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2020-12-01 - 公布日： 2022-10-18 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明属于酶工技术程领域，具体涉及普鲁兰酶酶分子的组合定点突变、突变体的筛选与表达制备。本发明以SEQ ID NO.2所示氨基酸的长野芽胞杆菌普鲁兰酶(PulA)为基础，通过定向分子进化，获得最适作用温度得到提高或降低、最适作用pH得到提高或降低、以及异源表达的水平显著提高的普鲁兰酶突变体，由此可改善普鲁兰酶的应用性能并拓展其应用领域，提升普鲁兰酶工业规模下的制造效率。
一种普鲁兰酶

[发明专利]一种具有洗涤剂抗性的普鲁兰酶PulY103B及其应用-CN202210022264.1在审
发明人：韩鹏;吴昕尧;吴永民 -专利权人：昆明理工大学
申请日： 2022-01-10 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种具有洗涤剂抗性的普鲁兰酶PulY103B，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其为Ⅰ型普鲁兰酶，具有洗涤剂抗性，能提高洗涤剂或去污剂的清洗能力，本发明为洗涤剂的增效提供了新的途径，且本发明普鲁兰酶PulY103B制备简单，适用于工业化生产和市场推广应用。
一种具有洗涤剂抗性普鲁兰酶 puly103b 及其应用

[发明专利]普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用-CN202210272672.2在审
发明人：王亚军;李树芳;徐沈远;张伟;郑裕国 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-03-18 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明公开了一种普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用，所述普鲁兰酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第365位、第401位、第504位或第499位氨基酸进行单突变或多突变获得的。本发明构建的普鲁兰酶突变体的催化活性、热稳定性与耐酸稳定性均得到了提高，其中突变体PulAR‑A365V‑401C‑H499A‑T504V的催化效率较野生型普鲁兰酶PulAR在pH5.0、6.0，60℃条件下分别提高了6.6倍与9.6倍；在60℃，65℃的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了2.6和3.1倍，且在pH 4.5与pH 5.0的半衰期分别比野生型普鲁兰酶提高了1.6和1.8倍。
普鲁兰酶突变体工程及其应用

[发明专利]一种普鲁兰酶及其应用-CN202210345517.9在审
发明人：王正祥;牛丹丹;田康明 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2020-12-01 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C12N9/44 文献下载
摘要：本发明属于酶工技术程领域，具体涉及普鲁兰酶酶分子的组合定点突变、突变体的筛选与表达制备。本发明以SEQ ID NO.2所示氨基酸的长野芽胞杆菌普鲁兰酶(PulA)为基础，通过定向分子进化，获得最适作用温度得到提高或降低、最适作用pH得到提高或降低、以及异源表达的水平显著提高的普鲁兰酶突变体，由此可改善普鲁兰酶的应用性能并拓展其应用领域，提升普鲁兰酶工业规模下的制造效率。
一种普鲁兰酶及其应用

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